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定量PCR试剂盒
探针法荧光定量PCR试剂盒
50T四辐射鸟圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒
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ARTICLESPCR反应鉴定——PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【产品名称】四辐射鸟圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒
【英文名称】Ornithostrongylus quadriradiatus
【产品编号】YSP7029
【包装规格】50T
【预期用途】
产品仅用于科研本产品可用于肉及肉制品中鸭源性成分的定性检测,所用仪器为实时荧光PCR仪,可通过实时扩增曲线判断样品中是否存在鸭源性成分。
【检验原理】
本试剂盒采用实时荧光PCR技术,针对鸭源性成分核酸序列设计特异性引物和荧光探针,通过实时荧光一步法RT-PCR(Taqman探针法)对鸭源性成分核酸进行定性检测。
*的扩增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及优化的反应体系保证更高的扩增效率。以相同量的293T细胞cDNA为模板,扩增β-actin基因,与同类产品相比,UNICONTM qPCR Master Mix扩增信号更强,扩增效率更高。
PCR实验方法步骤:
四辐射鸟圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤:
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线;
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
产品仅用于科研其中步骤(1)为:将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因,较佳地管家基因,优选地为RPPH1的扩增区域,其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体,较佳地为PCR克隆载体,优选地为TA cloning载体,所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1:1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1,解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题,提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为:待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因,较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因,更佳地为HER2基因的扩增区域,所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法,所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增,更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
实验步骤:
典型的PCR由
(1)高温变性模板;
(2)引物与模板退火;
(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其要步骤是:
将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。
97%1g1g竹节参皂苷V6976370thyroid hormone receptor interactor 6
趋化因子C-C-基元受体2(CCR2)重组蛋白英文名称:Recombinant Chemokine C-C-Motif Receptor 2 (CCR2)
维生素D受体(VDR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 STX3 / Syntaxin 3 蛋白 (His 标签)*250(g)
人白介素4(IL4)FBXL21/FBL3B FBXL21蛋白抗体规格:96T/48TAndrographolide规格:20mgKlotho蛋白检测试盒20mg人结肠直肠腺癌细胞,NCIH508细胞1x10^6cells
99%10g5g白花前胡香豆精III64431965Thyroglobulin
去甲乌药碱盐盐 质量规格:>98%,BR Higenamine hydrochloride
心肌肌钙蛋白I(TNNI3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 MAPRE3 / EB3 蛋白 (His 标签)*250(g)
人白介素3(IL3)FNDC2/5 Ⅲ型纤维连接蛋白域蛋白2/5抗体规格:96T/48TPowdered Andrographis Extract规格:125mgKlotho蛋白检测试盒20mg人结直肠癌尿嘧啶耐药株,HCT8/FU细胞1x10^6cells
二罗丹明1235mg
3,29-二甲酰基栝楼仁三醇 订购|咨询 规格: 10mg 大肠癌肿瘤突变蛋白抗体
转录子维相关孤儿受体检测试盒20mg补体成分5检测试盒Complement3
D荧光素盐5mg
蜕皮激素;β-蜕皮激素;β-蜕皮甾 英文名称:The molting hormone ecdysone; beta; beta ecdysterone 保存:-20℃ 规格:HPLC≥98% 20mg/支 Toll样受体6抗体
Casein HydrolysateBR膜攻击复合物检测试盒20mg补体蛋白3检测试盒Complement4
100g25ml过化酶(CAT)检测试剂盒(钼铵比色法)Cysteine leukotriene receptor 1
地奥司明; 香叶木苷; 布枯苷; 3', 订购|咨询 规格: HPLC≥98%,20mg/支 载脂蛋白A2抗体 AQP-1 ELISA Kit 水通道蛋白1(AQP-1)ELISA试剂盒
脂肪细胞膜关联蛋白检测试盒20mg补体蛋白4检测试盒Complementfragment3a
四辐射鸟圆线虫探针法荧光定量PCR试剂盒7O白杨素 CAS号: 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
巨大戟 CAS号: 30220463 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
25氧原人参三 CAS号: 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
3O没食子 CAS号: 3934847 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
57氧异黄 CAS号: 82517122 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
5糠醛 CAS号: 620020 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
金松双黄 CAS号: 521346 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
角鲨 CAS号: 7683649 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
氧醉椒素 CAS号: 500620 规格: HPLC≥98%;10mg 订购|咨询
异茜草素1 CAS号: 7460437 规格: HPLC≥98%;10mg 订购|咨询
肌 CAS号: 87898 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
酒石伐仑克林 CAS号: 375815875 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
黄连碱 CAS号: 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
剑麻皂苷元 CAS号: 77601 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
2金刚 CAS号: 700583 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
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