肠粘附性大肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

实验过程：
一、肠粘附性大肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2．产品仅用于科研对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：
产品名称：肠粘附性大肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Enteroadhesive E.Coli(EAEC)
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

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产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
以下是公司正在热销的产品：
Equine Herpesvirus 4 (EHV-4)马疱疹病毒4型LAMP试剂盒模式菌株分类革兰氏阴性细菌，细胞球状、短杆状，好氧，呼吸代谢。模式菌株

Equine Herpesvirus(EHV)马疱疹病毒通用LAMP试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，菌体杆状，发酵代谢葡萄糖主要产生乳酸。

Equine Infectious Anemia Virus(EIAV)马传染性贫血病毒RT-LAMP试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，形成芽孢。

Equine Influenza Virus(EIV)马流感病毒H3N8亚型RT-LAMP试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，形成芽孢。

Equine Papilloma Virus(EPV)马乳头瘤病毒LAMP试剂盒模式菌株分类嗜盐碱古菌。模式种；模式菌株

Equine Rhinitis Virus马鼻炎病毒LAMP试剂盒模式菌株分类嗜盐碱古菌。模式菌株

Equine Rhinopneumonitis Virus(ERV)马鼻肺炎病毒LAMP试剂盒非模式菌株研究革兰氏阴性细菌，细胞杆状，周生鞭毛运动，兼性厌氧，植物病原菌。

Equine Rotavirus马轮状病毒RT-LAMP试剂盒模式菌株分类革兰氏阴性细菌，细胞杆状，周生鞭毛运动，兼性厌氧，植物病原菌。

Equine Viral Arteritis Virus马病毒性动脉炎病毒RT-LAMP试剂盒非模式菌株研究革兰氏阴性细菌，化能异养，兼性厌氧，发酵代谢。

Erlichia sennetsu腺热埃里希体LAMP试剂盒模式菌株分类革兰氏阴性细菌，化能异养，发酵代谢。模式菌株

Erysipelothrix rhusiopathiae红斑丹毒丝菌（猪丹毒杆菌）LAMP试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，嗜碱细菌。

Erysipelothrix spp丹毒丝菌属通用LAMP试剂盒非模式菌株研究革兰氏阴性细菌，周生鞭毛运动，严格好氧，呼吸代谢。异养硝化

ESBL-Escherichia coli超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌（大肠埃希氏菌）LAMP试剂盒非模式菌株研究革兰氏阴性细菌，周生鞭毛运动，严格好氧，呼吸代谢。芳烃降解

ESBL-Klebsiella pneumoniae超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌LAMP试剂盒非模式菌株研究革兰氏阴性细菌，周生鞭毛运动，严格好氧，呼吸代谢。异养硝化

Escherichia spp.埃希氏菌通用LAMP试剂盒非模式菌株研究革兰氏阳性细菌，菌体细杆状；好氧，呼吸代谢为主。亚硝化
肠粘附性大肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒白血病相关蛋白7　DLEU7 Polyclonal Antibody

白细胞衍生趋化因子2　LECT2 Polyclonal Antibody

白细胞衍生趋化因子1　LECT1 Polyclonal Antibody

白细胞免疫球蛋白样受体6　LIRA1 Polyclonal Antibody

白细胞免疫球蛋白样受体3　LIRB3 Polyclonal Antibody

白细胞酪氨酸激酶1　LTK Polyclonal Antibody

白细胞介素增强子结合因子2　ILF2 Polyclonal Antibody

白细胞介素27受体α　I27RA Polyclonal Antibody

白细胞介素22受体α2　I22R2 Polyclonal Antibody
使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DN段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好。