如何解决细胞系培养板的密闭和污染问题

细胞系培养板的加样和操作：细胞培养板在进行细胞操作时同样遵循严格无菌的原则，各项操作要保证规范、科学，不对细胞的生长造成额外的影响。这其中zui常见的问题就是如何保证加样后细胞的均匀和尽量减少换液对细胞生长状态的影响。1.盖子很松，属于半开放培养，这样的目的是透气（实际上是为了使培养皿外的co2能够与培养皿充分交换，维持培养基的pH值）。2.凡事有利必有弊，这样当然增加了污染的可能性。此外这样还会使培养皿内的液体蒸发，这对于定量的药物来说就显得值得注意了。所以以下二条措施是必...

原代细胞生长的检查方法

原代细胞是zui简单的检测细胞生长的方法。计数细胞一般利用台盼蓝(锥虫蓝染色，台盼蓝(锥虫蓝)不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色。因此，镜下未染色细胞认为是活细胞，而染色细胞认为是死亡细胞。经典的细胞计数常用到血细胞计数板。细胞消化成单个细胞后，将细胞悬液加入血盖片和计数板之间的空隙中，通常我们计数计数板的四角大方格(每个大方格又分16个小方格)内的细胞数。计完数后，需换算出每ml悬液中的细胞数。由于计...

原代细胞或可调节血管口径和通透性

原代细胞在酶的作用下，由它再进一步生成一组旁分泌激素物质，如血栓素和前列腺素等，这类物质对调节血管口径和通透性有明显的作用，还能引起炎症反应和疼痛，并影响血液凝固。中性粒细胞内含许多弥散分布的细小的浅红或浅紫色的*颗粒，颗粒中含有髓过氧化物酶、酸性磷酸酶、吞噬素、溶菌酶等。髓过氧化物酶是中性粒细胞所*，即使在有强吞噬作用的巨噬细胞中也极少或*没有这种酶。在细胞化学上，一般将这种髓过氧化物酶作为中性粒细胞的标志。中性粒细胞具有很强的趋化作用。所谓趋化作用，就是细胞向着某一化学物...

原代细胞活力评估难度低

传统的原代细胞培养主要是通过显微镜下形态学变化以及传代培养周期的变化预估细胞生长生存状态。这种主观判断既无法量化，也无法进行统计学分析。因此，目前对细胞存活质量的判断并没有准确、客观的统一标准，并且对体外培养细胞的存活质量控制往往被科研工作者们“忽略”，从而导致实验结果的不稳定。体外细胞的有效培养新概念——“细胞质控”。通过细胞活力、细胞凋亡、细胞周期、细胞增殖及DNA损伤五方面对细胞生长生存状态进行的监控。在这五个方面中，影响zui大的便是细胞活力，下面咱们专门来谈一谈细胞...

细胞株为何不贴壁？

总结细胞株不贴壁可能原因如下：●胰蛋白酶消化过度●支原体污染●培养基pH值过碱（NaHCO3分解）●细胞老化●接种细胞起始浓度太低或太高解决方法：●缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度●分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物●使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2●细胞株启用新的保种细胞●调节*接种细胞浓度150mgPygeumExtract94279-95-5水杨梅提取物标准品150mgPheniramineMaleate132-20-...

原代细胞实验中淋巴细胞转化的实验

原代细胞实验中正常机体的T淋巴细胞在体外培养过程中受到特异性抗原或有丝分裂原刺激。可转化为淋巴母细胞。细胞免疫缺陷时，患恶性肿瘤或某些其他疾病时。转化率显然降低。目前zui常用植物血凝素（PHA）作为分裂原来检测受试者的淋巴细胞转化率，从而判定其细胞免疫功能，称为PHA刺激淋巴细胞实验的转化实验。实验材料肝素试剂、试剂盒199培养液小牛血清链霉素青霉素PHA仪器、耗材注射器针头试管吸管离心机实验步骤1.采肝素抗凝血1~2毫升（1毫升血中加肝素20单位）充分混匀。37℃静置1~...

细胞株冻存技术综述

细胞株实验室低温保存设备包括：液氮保存箱、液氮罐、-140℃/-150℃深冷低温保存箱、-86℃超低温冰箱、程控降温仪、低温冰箱（-20℃、-30℃、-40℃）、药品保存箱、疫苗保存箱、血库冰箱、层析柜、防爆冰箱、防火冰箱等。检验冰箱可靠性和制冷能力的方法：1、常规冰箱放置温度计；2、超低温冰箱放置加热器、大量样品或反复开门冻存保护剂很多化合物都可以作为冻存保护剂，它们既可以单独使用也可以联合使用，例如糖、血清和去污剂。虽然冻存没有的准则，但是大家普遍认为二甲基亚砜（DMSO...

原代细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤

原代细胞实验试剂1.细胞营养液（DMEM液体培养基，10％胎牛血清，双抗100单位/ml），消化液（0.05％胰酶，0.53mMEDTA·Na），Hank’s液。2.2×HBS液（280mMNaCl,10mMKCl,1.5mMNaHPO4·2H2O,12mM葡萄糖，50mMHepes，pH7.05,0.2μ过滤除菌），CaCl2（2.5M，0.2μ过滤除菌）溶液，超纯水（灭菌）。3.PBS，蛋白酶K，NP40，RNaseA，无水乙醇，酚，DNA上样缓冲液，琼脂糖，TAE电泳缓...