细胞株冻存技术综述

细胞株实验室低温保存设备包括：液氮保存箱、液氮罐、-140℃/-150℃深冷低温保存箱、-86℃超低温冰箱、程控降温仪、低温冰箱（-20℃、-30℃、-40℃）、药品保存箱、疫苗保存箱、血库冰箱、层析柜、防爆冰箱、防火冰箱等。检验冰箱可靠性和制冷能力的方法：1、常规冰箱放置温度计；2、超低温冰箱放置加热器、大量样品或反复开门冻存保护剂很多化合物都可以作为冻存保护剂，它们既可以单独使用也可以联合使用，例如糖、血清和去污剂。虽然冻存没有的准则，但是大家普遍认为二甲基亚砜（DMSO...

原代细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤

原代细胞实验试剂1.细胞营养液（DMEM液体培养基，10％胎牛血清，双抗100单位/ml），消化液（0.05％胰酶，0.53mMEDTA·Na），Hank’s液。2.2×HBS液（280mMNaCl,10mMKCl,1.5mMNaHPO4·2H2O,12mM葡萄糖，50mMHepes，pH7.05,0.2μ过滤除菌），CaCl2（2.5M，0.2μ过滤除菌）溶液，超纯水（灭菌）。3.PBS，蛋白酶K，NP40，RNaseA，无水乙醇，酚，DNA上样缓冲液，琼脂糖，TAE电泳缓...

原代细胞进行重组的方法

原代细胞成人非肌肉组织（比如皮肤或血液）的iPS细胞进行重组，使其退回到原始状态，然后加入大量Pax7分子，向细胞发送信号，让其开始变成肌肉。随着细胞不断增多，它们变得非常类似成人肌肉干细胞。随后，研究人员停止供应Pax7信号分子，并为这些细胞提供支持和营养，让其*发育成熟。结果表明，经过2周到4周的三维培养，得到的肌肉细胞会形成能像人体肌肉组织一样收缩并对外部刺激作出反应的肌肉纤维。当植入成年老鼠体内，这些肌肉纤维能存活且运作至少3周，并通过血管化过程，与老鼠自身组织融合到...

原代细胞敏锐的判断力

原代细胞表面一定需要一个CD47的“信号接收器”，那就是信号调节蛋白α（SIRPα）。那么这是不是意味着，如果在体内抑制SIRPα的表达，巨噬细胞就可以恢复敏锐的判断力，吞噬癌细胞了呢？这并不是一个新鲜的想法，有不少科学家都在开发CD47抗体，阻止它与SIRPα结合。然而，这些药物往往都存在一个共同问题：巨噬细胞会变得“敌我不分”，在减小了肿瘤的同时，也迅速消灭了血液循环中的血细胞，这除了会引起贫血外，更严重的是会导致自身免疫疾病，结果接受治疗的小鼠没被肿瘤“害死”，倒是先倒...

原代细胞在再生医学中的应用

原代细胞在再生医学中的应用前景巨大，遗传物质稳定是其安全应用的前提。和分化细胞相比，干细胞的细胞周期短，DNA复制频繁，且细胞周期中G1期十分短暂，并缺乏G1细胞周期检查点，这些特征使干细胞在DNA复制中面临巨大的复制压力。复制压力是内源性DNA损伤和基因组不稳定的主要来源，有效处理复制压力是细胞维持遗传物质稳定性的重要途径。目前，干细胞如何有效处理复制压力尚不清楚。郑萍课题组研究了多能干细胞对DNA复制压力的处理能力及分子机制。通过系统比较小鼠胚胎干细胞和不同类型的快速分裂...

肿瘤细胞入门级指标

肿瘤细胞毒性的入门级指标是细胞活力。判断一种物质（化合物、小分子药物或蛋白质等）对细胞的毒性首先要观察的是其是否或诱导细胞死亡，即细胞活力的变化。以维生素C为例，研究发现，高浓度维生素C对眼癌细胞Y79RetinoblastomaCells具有杀伤作用。文章中，作者以眼癌常用化疗药Melphalan作为对照，对经过处理的细胞活性进行检测，发现，随着浓度的升高，维生素C对Y79RetinoblastomaCells杀伤作用逐渐增强，并且维生素C对眼癌细胞的杀伤作用优于Melph...

原代细胞动态变化

原代细胞抑制骨髓造血被作为教科书般的常识。周波等的工作发现，骨髓脂肪细胞能够通过分泌造血干细胞必须生长因子SCF促进放化疗后造血干细胞的再生。利用条件性敲除技术将Scf从骨髓脂肪细胞中敲除，会导致放化疗后造血干细胞再生的缺陷，进而降低小鼠的血氧水平和生存率。周波等的前期工作显示，在生理条件下，内皮细胞和血管外周的间充质干细胞是造血干细胞巢（niche）的核心组分，它们通过结构性或功能性的机制促进造血干细胞的自我更新。在zui近的这项研究中，研究人员发现放疗或化疗之后生理性的造...

原代细胞消化过度的注意事项

1.原代细胞不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）其实烧...