细胞株的形态学观察和检定

细胞株的形态学观察及鉴定：细胞换液后直接在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长特征，并作相差摄影，同时进行常规HE染色观察并摄片。鉴定采用DAB免疫组织化学法，在6孔培养板中放置载玻片，在玻片上植入2ml含有1×106的细胞悬液，待细胞贴壁后，取出载玻片，放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS冲洗3次，每次2min,滴加3%H2O2室温孵育10min，PBS冲洗3次，每次2min,以消除内源性过氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相关抗原多抗工作液，放入湿盒内4℃过夜，同时另一盖玻片不加一抗作阴性对照。次日，用PBS冲洗3次，每次2min,滴加辣根酶标记的羊抗兔IgG, 37℃孵育30min, 用PBS冲洗3次，每次2min,用DAB底物混合工作液显色，显微镜下观察，待出现特异性染色后，终止显色，进行复染，脱水，透明，封片，相差显微镜下观察摄影。

细胞株的形态学观察：相差倒置显微镜下观察，人脐静脉内皮细胞贴壁单层生长，呈短梭状或铺路石样镶嵌排列，细胞为扁平多角形，边界清楚，胞浆丰富。胞核清晰可见，为圆形或椭圆形。原代培养细胞，于接种后2h开始贴壁生长，传代细胞约半小时后即开始贴壁生长。原代细胞一周左右可长满，传代细胞生长旺盛，有时可见多核细胞。

Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定：细胞株Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色可见细胞呈圆形、梭形或多边形，胞浆内可见棕黄色颗粒，核周密集，而对照组内未见着色。证实培养的细胞为内皮细胞。

 磷酸化谷氨酸受体1IgG 人抗甲型肝炎病毒IgG(anti-HAV) 

 磷酸化谷氨酸受体1IgG 人抗肌内膜IgA(EMA IgA)

 磷酸化谷氨酸受体2AIgG 人抗肌联蛋白(TTN)

 磷酸化谷氨酸受体2AIgG 人抗肌动蛋白(AAA)

 磷酸化谷氨酸受体2BIgG 人抗环胍氨酸肽(CCP)

 磷酸化谷氨酸受体2BIgG 人抗呼吸道合胞病毒(RSV)

 磷酸化过氧化酶活化增生受体γIgG 人抗红(RBC) 

 磷酸化荷尔蒙敏感脂肪酶IgG 人抗丁型肝炎病毒(anti-HDV) 
细胞株