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定量PCR试剂盒
探针法荧光定量PCR试剂盒
50T星状诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒
产品展示
PRODUCT CATEGORY相关文章
ARTICLES参数规格:
产品名称:星状诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称:Nocardia asteroides
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。
产品及特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
实验过程:
一、星状诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2.产品仅用于科研对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DN段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好。
以下是公司正在热销的产品:
Betaine钥孔虫戚血蓝蛋白检测试剂盒20mg
辛弗林(标准品) 质量规格:HPLC≥98%,标准品 Synephrine
17-羟孕(17-OHP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 标签)*1000(g)
人基质金属蛋白酶10(MMP10)PhosphoTrkA (Ser791) 化酪氨激酶A抗体规格:96T/48T规格:1gE选择素检测试盒10mg人状腺癌细胞,FTC133细胞1x10^6cells
98%25g1g白花前胡香豆精I58151Chitinase 3like Protein 1
人腺细胞英文名称:MX-1
雌三醇(E3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 S100A4 蛋白 (His 标签)*250(g)
人基质金属蛋白酶1(MMP1)AGPHD1 氨基糖苷类结构域蛋白抗体规格:96T/48TAmobarbital CII规格:1gFK506结合蛋白52检测试盒20mg人状腺癌细胞,K1细胞1x10^6cells
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6,7-二基香豆 英文名称:6, 7- two methoxy coumarin 保存:-20℃ 规格:20mg 化蛋白激酶C亚性抗体
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姜黄素 英文名称:Curcumin 保存:-20℃ 规格:HPLC≥98% 20mg/支 四分子交联体9/四旋蛋白抗体
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去基异波尔定6ROX 亚酰5mg
兰雪醌,白花丹醌,白花丹素(标准品) 质量规格:HPLC≥98%,进口标准品 Plumbagin 酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeJAR(人胎盘绒毛膜细胞)
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愈创木 CAS号: 32994 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
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盐白屈菜红碱 CAS号: 3895929 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
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野菊花内 CAS号: 62687223 规格: HPLC≥98%;10mg 订购|咨询
2O酰山椒子 CAS号: 规格: HPLC≥98%;10mg 订购|咨询
柚皮素7O葡萄糖醛苷 CAS号: 158196340 规格: HPLC≥98%;10mg 订购|咨询
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酰蝙蝠葛苏林碱 CAS号: 规格: HPLC≥98%;10mg 订购|咨询
一叶萩碱 CAS号: 5610402 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
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