巴西诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

实验过程：

一、巴西诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒试剂准备

1.DNA模板

2.产品仅用于科研对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶

二、操作步骤

1.在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer： 5μl

dNTP mixl：4μl

引物1（10pM）：2μl

引物2（10PM）：2μl

Taq酶（2U/μl）：1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）：1 μl

加ddH2O至：50μl

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃保温7min。

3.结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4.PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

参数规格：

产品名称：巴西诺卡菌探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Nocardia brasiliensis

产品规格：50T

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量PCR产品

运输及保存：

低温运输，-20℃保存，保存期限一年。

自备试剂

DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。


产品及特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。

2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。

3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。

4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。

5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。

以下是公司正在热销的产品：

二甲四(标准品) 质量规格：分析标准品 MCPA

MBP(Myelin Basic Protein, MBP)peptide  髓鞘碱性蛋白(多肽抗原)现货供应可溶性瘦素受体检测试盒1gHuman/人Elisa试盒4903360

阿曼托黄6HEX 亚酰5mg

油甲酯(分析标准品,>99.0%(GC)) 质量规格：分析标准品,>99.0%(GC) Methyl oleate

NPY ( Neuropeptide Y)136  神经肽 Y（136多肽）进口、分装爱泼斯坦尔病潜伏膜蛋白2A检测试盒5gHuman/人Elisa试盒4906245

盐去骆驼蓬碱 CAS号： 343271 规格： HPLC≥98%; 20mg 订购|咨询

右旋四巴马汀 CAS号： 3520147 规格： HPLC≥98%; 20mg 订购|咨询

原百部次碱 CAS号： 169534854 规格： HPLC≥98%;10mg 订购|咨询

原百部碱 CAS号： 27495405 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

雅姆皂苷元 CAS号： 512061 规格： HPLC≥98%;10mg 订购|咨询

3南美楝属二 CAS号： 35833626 规格： HPLC≥98%;10mg 订购|咨询

酰二美味草素A CAS号： 94285220 规格： HPLC≥98%;10mg 订购|咨询

羽扇 CAS号： 1617705 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

叶绿 CAS号： 150867 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

盐碱 CAS号： 3738703 规格： HPLC≥98%;10mg 订购|咨询

异甜菊 CAS号： 27975195 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

野鹫尾苷 CAS号： 491747 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

3酰11乳香 CAS号：  规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

3酰乳香 CAS号：  规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DN段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好。