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定量PCR试剂盒
探针法荧光定量PCR试剂盒
50T亚洲分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
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ARTICLES实验步骤:
典型的PCR由
(1)高温变性模板;
(2)引物与模板退火;
(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其要步骤是:
将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。
【产品名称】亚洲分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒
【英文名称】Mycobacterium asiaticum
【产品编号】YSP6944
【包装规格】50T
【预期用途】
产品仅用于科研本产品可用于肉及肉制品中鸭源性成分的定性检测,所用仪器为实时荧光PCR仪,可通过实时扩增曲线判断样品中是否存在鸭源性成分。
【检验原理】
本试剂盒采用实时荧光PCR技术,针对鸭源性成分核酸序列设计特异性引物和荧光探针,通过实时荧光一步法RT-PCR(Taqman探针法)对鸭源性成分核酸进行定性检测。
*的扩增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及优化的反应体系保证更高的扩增效率。以相同量的293T细胞cDNA为模板,扩增β-actin基因,与同类产品相比,UNICONTM qPCR Master Mix扩增信号更强,扩增效率更高。
PCR实验方法步骤:
亚洲分枝杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤:
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线;
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
产品仅用于科研其中步骤(1)为:将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因,较佳地管家基因,优选地为RPPH1的扩增区域,其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体,较佳地为PCR克隆载体,优选地为TA cloning载体,所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1:1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1,解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题,提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为:待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因,较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因,更佳地为HER2基因的扩增区域,所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法,所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增,更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
AstragalosideⅢ中性粒细胞防御素13检测试剂盒20mg
饿蚂蝗 英文名称:Manyflower tickclove herb 保存:-20℃ 规格:1g 色素上皮源性因子抗体
抗核糖体抗体(Anti-rRNP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (His 标签)*1000(g)
Flt3L(Human FMSlike tyrosine kinase 3 ligand) ELISA Kit 人FMS样酪氨激酶3配体CAS号:112809515 花青素还原酶检测试盒50THuman/人Elisa试盒3034535
AstragalosideⅡ中性粒细胞防御素3检测试剂盒20mg
五味子醇乙;schisandrol B 规格: 20mg 订购|咨询 MEM培养基/伊格尔培养基/伊格尔极限必需培养基/MEM/SMEM细胞培养用10升国产/进口
和肽素(CPP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 KIT / c-KIT / CD117 蛋白 (Fc 标签)*250(g)
ACE(Human Angiotensin converting enzyme) ELISA Kit 人血管紧张素转化酶CAS号:112801 核糖核检测试盒100THuman/人Elisa试盒3034535
毕灵;荷包牡丹;乌龟Lip2000转染试剂5mg
甲基反亚油甲酯(分析标准品) 质量规格:分析标准品 Methyl linolelaidate
pig IgG (亲和纯化) 猪IgG进口、原装硫酰肝素检测试盒100gHuman/人Elisa试盒478980039
3,5,7三羟基黄CCK试剂盒5mg
3,29-二甲酰基栝楼仁三醇 英文名称:3,29- two benzoyl Trichosanthes Jen three alcohol 保存:-20℃ 规格:HPLC≥98% 10mg/支 短链L-3羟基辅酶A脱氢酶抗体
pig IgM (亲和纯化) 猪IgM现货供应溶血素O检测试盒25gHuman/人Elisa试盒478980040
奇壬醇CCK试剂盒5mg
L-亮氨 订购|咨询 规格: 20mg 粘蛋白13抗体
Mink IgG 貂IgG (亲和纯化)*可溶性凋亡相关子检测试盒100gHuman/人Elisa试盒478980040
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3O没食子;3OMethy CAS号: 3934847 规格: 20mg 订购|咨询
57氧异黄;5Meth CAS号: 82517122 规格: 20mg 订购|咨询
5糠醛;5Methyl furf CAS号: 620020 规格: 20mg 订购|咨询
芥子碱盐;Sinapine thi CAS号: 7431778 规格: 20mg 订购|咨询
4氧杨;2Hydroxy4 CAS号: 673223 规格: 20mg 订购|咨询
金松双黄;Sciadopitysin CAS号: 521346 规格: 20mg 订购|咨询
角鲨;Squalene CAS号: 7683649 规格: 20mg 订购|咨询
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异茜草素1 ;Rubiadi CAS号: 7460437 规格: 10mg 订购|咨询
姜;Zingerone CAS号: 122485 规格: 20mg 订购|咨询
莲心碱;Neferine CAS号: 2292162 规格: 20mg 订购|咨询
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