原代细胞分析之全攻略

原代细胞转录组学和蛋白质组学NanoStringTechnologies的科学家发现，细胞群体的RNA平均表达水平不一定与群体中单个细胞的RNA表达相同。例如，有些基因持续在低水平表达，而另一些则在短时间内大量表达。对宏观测定而言，这样的表达模式被平均化。该公司*的数字表达谱分析系统能直接对单个RNA分析进行计数，zui多可分析单细胞中的800个不同分子。这是利用nCounterSingleCellGeneExpressionAssay中的分子条形码来实现的，它识别特定的RN...

避免污染的原代细胞培养方法

培养原代细胞常规方法需用二氧化碳温箱，且为保持箱内二氧化碳气5%～10%的浓度，需持续输入二氧化碳气体。为此，箱内的培养瓶盖不能拧紧以便二氧化碳气体自由进出。*步，配制1L培养液。培养基中含有酚红指示剂，偏碱时液体为深红或紫色，偏酸时则呈黄色。取配1L培养液的粉剂培养基，加入750ml三蒸水或去离子水，摇匀(一般培养液呈橘红色)；再加入碳酸氢钠1～1．1g，至*溶解(呈深红色)；zui后再加三蒸水或去离子水至1L止。第二步，插吸管于配好的培养液内，通入二氧化碳气体。随着二氧化...

原代细胞被支原体污染的危害

为什么有些原代细胞实验无法重复？为什么有的细胞在相当长的时间里，都养不到好的状态？为什么实验室中，超过一株以上的细胞都时好时坏？细胞生长缓慢、细胞变形、碎片增加、悬浮细胞容易成团、培养基提前变色、镜下发现有小黑点……如果排除了其他试剂选择不当、细胞株老化、细菌污染等原因，而仍有上述一种或几种情况，则高度提示——你的细胞可能被支原体污染了！支原体污染普遍存在据美国数据统计，细胞发生支原体污染的几率在70%以上。同时，由于支原体直径很小，仅在180nm~350nm之间，只有通过电...

细胞株污染的清除

培养细胞株一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之;在寻找原因后*消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。一、细菌和真菌的清除1、使用抗生素抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素，污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期有效。二、支原体的清除1、用MRA处理用MRA(Mycopl...

细胞株增殖实验服务

细胞株增殖是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础，是细胞zui基本的生理活动。生长因子、激素及癌基因产物等均可诱导细胞的增殖或抑制细胞的增殖，通过影响细胞周期、诱导细胞凋亡而实现。MTT检测细胞增殖MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide。MTT比色法是常用的检测细胞存活和生长的方法之一，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细...

细胞株状态不好的解决方法

细胞株是生物体形态结构和生命活动的基本单位。通常认为细胞是人体的zui小单位，它是由许多更小的具有自身功能的结构组成。尽管人类细胞大小不等，但所有的细胞均很小。即使是zui大的细胞如受精卵，也是肉眼所不能见到的。细胞状态不好，可能是血清中有黑胶虫。解决方法如下：1.换好一点的血清。2.用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。注意好实验环境要，保持细胞间整个环境的洁净度。3.换用进口的一次性塑料培养瓶。4.建议清理无菌室所有物品，重新灭菌，用KMnO4熏蒸，按使用无菌室做，细胞...

原代细胞试探性的开端

研究人员成功培养出来自小鼠胚胎的原代细胞。他们很快意识到这项发现的巨大潜力，因为这些细胞既能自我复制，又可被推动变成身体200余种细胞类型中的任何一种。不过，此项技术并不容易在灵长类动物身上实现。威斯康辛大学麦迪逊分校生物学家JamesThomson花了14年时间，才将该技术成功用于猴子。3年后，Thomson利用生育治疗中未使用的捐赠胚胎，创建了人类ES细胞系。此项发现激起了一场道德风暴。批评者——大多数来自宗教界——认为胚胎构成了人类的一部分，并且想阻止任何涉及破坏胚胎的...

细胞株的形态学观察和检定

细胞株的形态学观察及鉴定：细胞换液后直接在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长特征，并作相差摄影，同时进行常规HE染色观察并摄片。鉴定采用DAB免疫组织化学法，在6孔培养板中放置载玻片，在玻片上植入2ml含有1×106的细胞悬液，待细胞贴壁后，取出载玻片，放入-20℃的冷丙酮中固定30min,用PBS冲洗3次，每次2min,滴加3%H2O2室温孵育10min，PBS冲洗3次，每次2min,以消除内源性过氧化物酶的活性。滴加兔抗人Ⅷ因子相关抗原多抗工作液，放入湿盒内4℃过夜，同时另...