肿瘤细胞如何进行传代？

肿瘤细胞是科研实验中常用到的细胞，当人脐静脉内皮细胞达到90%融合时，需要对细胞进行传代培养。首先培养瓶的准备：用纤维粘连蛋白（BPF，货号#8248）包被培养瓶，包被浓度为2ug/cm2，包被时间为4度过夜或37度一小时。将培养基（ECM，货号#1001）、胰酶/EDTA消化液（T/S，货号#0103）、胰酶中和液（TNS，货号#0113）和无钙镁离子的磷酸盐缓冲液（DPBS，货号#0303），温度回复至室温，我们不推荐用37°C水浴加热试剂和培养基。弃去原培养瓶中培养基，...

原代细胞因子中全血的标本处理方法

原代细胞因子中全血的标本处理方法分析：我们针对全血：使用肝素钠抗凝的真空采血管采血，不易采用肝素锂、EDTA和ACD抗凝剂，血样在8小时内分析，超过8小时会导致活性的损失，一般细胞因子阳性细胞会减少5%。如不能在8小时之内检测，应将真空采血管水平室温放置。自身血浆中外周血单个核细胞（PBMCs）：使用肝素钠抗凝的采血后，分离PBMCs，24小时内分析。组织培养基中的外周血单个核细胞（PBMCs）：用Ficoll分离PBMCs，将细胞重悬于含10%热灭活胎牛血清（FBS）的RP...

细胞系如何分配任务并解决问题

从生物学角度了解不同类型细胞系如何一起工作是一个极大的未知数。例如，我们不知道大脑中每种细胞的数量，甚至连脑细胞的类型都还处于持续争论状态。一个恰当的理论框架，可以集中所有的实验数据和观点，共同用于理解生物的复杂性。1950s，人们开发了信息理论，用于研究如何用有效的方式发送信息，减少错误。这个理论也与大脑神经元的相互交流有关。Sharpee利用信息学理论识别支配生物复杂性的基本定律，用它来预测系统内总共有多少种细胞，以及这些细胞应该如何协作。2015年，研究人员们将他们的这...

细胞株计数的难题与解决方案

细胞株和病毒的放大培养面临挑战。当需要量增加千倍时，细胞培养瓶对于工业规模是不可行的。微载体为生物反应器中贴壁细胞的生长提供了方便，微载体充当贴壁细胞可附着的支架，允许它们增殖，而生物反应器使细胞-微载体复合体自由悬浮在培养基中。因此，贴壁细胞也可以像悬浮细胞那样生长，从而简化了放大培养，并允许利用现有的资源用于过程优化和。传统方法的微载体的细胞计数耗时耗力，且计数结果不准确，需要离心样品、PBS重悬、胰蛋白酶消化细胞和台盼蓝或者结晶紫染色等多个步骤来计数在微载体上生长的细胞...

原代细胞实验室检测方法

原代细胞实验室检测（一）包涵体的检测。1.血片及白细胞涂片制备采集的抗凝血标本尽快用血球层推血片，待干燥后冷丙酮固定10min；或提取抗凝血中的白细胞并进行涂片，待干燥后冷丙酮固定10min。2.染色通常采用瑞氏（Wright）染色法、姬氏（Giemsa）染色法及瑞－姬混合染色法。有条件的实验室，可使用美国CDC推荐的染色方法。3.染液配置方法（1）瑞－姬染液：取瑞氏染料和姬氏染料各0.5g，以甲醇研溶，加甲醇500ml保存，每天摇匀１次，１周后可使用。（2）改良McDona...

原代细胞增殖生长数值的步骤

测定原代细胞增长数值常用zui简便的方法。一般过程为1.接种21孔/24孔板细胞（如用培养瓶时则21瓶）。2.分7组，每组3孔（或瓶），培养一周（7天），期间逐日检测一组，计数。3.把7天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶仪器、耗材吸管实验步骤1.悬液制备取待测生长状态良好细胞，增长至接近汇合时，向培养瓶内加1ml升0.25%胰蛋白酶液，37℃温箱中消化，至细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液、加新的培养液、轻吹打制备成细悬液、计数；2.接种向每孔...

保持原代细胞其多能性的蛋白质的方法

蛋白质Tet能帮助原代细胞保持多能性。Zhang研究组分析了Tet1在整个小鼠胚胎干细胞基因组中的存留时间。他们发现Tet1采用双管齐下的办法维持小鼠胚胎干细胞的状态。一方面，Tet1可对分化起重要作用的基因保持"沉默"；另一方面Tet1也可激活多能性基因。研究组着重于研究Tet1催化反应产物-5羟甲基胞/嘧啶。5羟甲基胞嘧啶是胞嘧啶的修改版-C在四个主要的DNA碱基：A、T、G、C。5羟甲基胞嘧啶和5甲基胞嘧啶分别被称为是DNA第五、第六个碱基，但是5羟甲基胞嘧啶是zui近...

如何判断原代细胞污染了？

状态1：原代细胞培养液变浑浊了，经常见到是米汤样，黄色液体，一般认为细菌污染。状态2：细胞培养基内含有能动的小黑点，一般认为是黑胶虫。状态3：胞培养基清亮，但是能看到飘在培养液带有毛毛的白色的菌状物质，有可能就是真菌感染。策略：细胞污染了就直接扔了，还得把培养箱用酒精棉球擦干净，并用紫外照射半小时，防止再次污染。同时建议细胞培养时，在培养基中加入青链霉素(尤其是初学者)细胞培养过程中，细胞周围包括细胞上有很多小黑点，怎么办?策略1：用胰酶消化下来后，低速短时间离心，不同实验室...