原代细胞培养中不要使用抗生素的原因

原代细胞由于过滤技术的提高和超净台质量的改进，在规范的细胞培养操作过程中引进污染的机会已经被大大降低了。所以比较合理的建议是，在常规的细胞培养中不要使用抗生素。只有在培养污染源很多（比如组织培养），或者培养非常珍贵的细胞株时才使用抗生素。抗生素虽然减少了可以观察到的细菌、酵母等微生物的污染机会，却会增加支原体、病毒等隐性污染的机会。因为细胞培养中污染主要来源于空气中的微粒和汽雾，而这些微粒和汽雾可以同时携带支原体、病毒和其他微生物。当抗生素使用时，可见污染被抑制而隐性污染又没...

原代细胞培养的起源

原代细胞是在标准条件下用有限或连续细胞系开展工作的.所以,考虑培养物中的细胞成分非常重要.如细胞在诱导条件下表现分化特征,要么意味着培养的细胞是成熟的,保持其持续合成特殊蛋白质的能力就够了;要么意味着培养细胞由前体细胞或干细胞组成,这些细胞有增殖能力,美工维持未分化状态,当有了合适的诱导条件,其中的一些或全部细胞会成熟并分化.有指导意义的考虑是,把培养物看成是由多能干细胞,未分化的定向前体细胞和成熟细胞组成的平衡状态,并且,这种平衡可随环境条件变化而改变.在细胞密度较低的情况...

原代细胞新打印技术存活率高

研究人员开发出一种可将原代细胞打印到任何表面和几乎任何形状上的技术，且整个过程中几乎所有的细胞仍能存活。新技术犹如中国古代木刻版印刷术和现在儿童橡皮印章玩具，与喷墨打印方法有所不同。这种方法在短短半个小时内可产生2D细胞阵列，打印出的细胞紧密到接近5微米（大多数动物细胞在10到30微米宽），并允许使用许多不同类型的细胞。研究人员将这种技术命名为批量细胞打印（BloC打印）。喷墨打印方法打印二维和三维细胞已基本成功，但有时只有一半细胞在打印过程中存活。秦立冬说：“基于喷墨的细胞...

原代细胞分析之全攻略

原代细胞转录组学和蛋白质组学NanoStringTechnologies的科学家发现，细胞群体的RNA平均表达水平不一定与群体中单个细胞的RNA表达相同。例如，有些基因持续在低水平表达，而另一些则在短时间内大量表达。对宏观测定而言，这样的表达模式被平均化。该公司*的数字表达谱分析系统能直接对单个RNA分析进行计数，zui多可分析单细胞中的800个不同分子。这是利用nCounterSingleCellGeneExpressionAssay中的分子条形码来实现的，它识别特定的RN...

避免污染的原代细胞培养方法

培养原代细胞常规方法需用二氧化碳温箱，且为保持箱内二氧化碳气5%～10%的浓度，需持续输入二氧化碳气体。为此，箱内的培养瓶盖不能拧紧以便二氧化碳气体自由进出。*步，配制1L培养液。培养基中含有酚红指示剂，偏碱时液体为深红或紫色，偏酸时则呈黄色。取配1L培养液的粉剂培养基，加入750ml三蒸水或去离子水，摇匀(一般培养液呈橘红色)；再加入碳酸氢钠1～1．1g，至*溶解(呈深红色)；zui后再加三蒸水或去离子水至1L止。第二步，插吸管于配好的培养液内，通入二氧化碳气体。随着二氧化...

原代细胞被支原体污染的危害

为什么有些原代细胞实验无法重复？为什么有的细胞在相当长的时间里，都养不到好的状态？为什么实验室中，超过一株以上的细胞都时好时坏？细胞生长缓慢、细胞变形、碎片增加、悬浮细胞容易成团、培养基提前变色、镜下发现有小黑点……如果排除了其他试剂选择不当、细胞株老化、细菌污染等原因，而仍有上述一种或几种情况，则高度提示——你的细胞可能被支原体污染了！支原体污染普遍存在据美国数据统计，细胞发生支原体污染的几率在70%以上。同时，由于支原体直径很小，仅在180nm~350nm之间，只有通过电...

细胞株污染的清除

培养细胞株一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之;在寻找原因后*消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。一、细菌和真菌的清除1、使用抗生素抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素，污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期有效。二、支原体的清除1、用MRA处理用MRA(Mycopl...

细胞株增殖实验服务

细胞株增殖是生物体生长、发育、繁殖、遗传的基础，是细胞zui基本的生理活动。生长因子、激素及癌基因产物等均可诱导细胞的增殖或抑制细胞的增殖，通过影响细胞周期、诱导细胞凋亡而实现。MTT检测细胞增殖MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide。MTT比色法是常用的检测细胞存活和生长的方法之一，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细...