从原培养容器中分离细胞操作流程

细胞系从基层迅速分离细胞，且保持细胞完整性的一般步骤。这一步骤并不意味着对于所有细胞系的广泛应用，每一种系统*条件和施用浓度应该根据经验加以确定。再次培养时检测细胞的活性。细胞的活率应该超过90%对于无血清培养基，降低胰蛋白酶使用量。1.移弃使用过的细胞培养基。2.使用不包含有钙镁的平衡盐溶液或EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸.)清洗细胞系(看表确定正确的清洗溶液)。在培养瓶对着细胞的一面加入清洗溶液，通过转动培养瓶1到2分...

成纤维细胞排除法操作流程

1.原代细胞机械刮除法：是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头(用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝)、或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用(也可用特制电热烧灼器刮除)。刮除程序为：(1)标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位;(2)刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间;(3)用Hanks液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞;(4)注入培养液继续培养，如发现仍有成纤维细胞残留，可重复刮除至*除掉为止2.反复贴壁法：根据肿瘤细胞比...

对淋巴细胞系进行体外刺激预孵育、或板内同步刺激培养

1、将抗原和淋巴细胞系在体外混合，刺激并预孵育，是通用的方法。预孵育的淋巴细胞，在置入ELISPOT板之前应使用复温到37℃的培养液清洗细胞1-2次。置入ELISPOT板以后通常在37℃培养5～6小时。2、对于高度特异性抗原，可以采用将淋巴细胞和抗原同时加入ELISPOT板孔中，37℃培养箱中，同步进行刺激、培养、和细胞因子捕获。淋巴细胞板内同步刺激培养的时间通常为22～24小时。3、ELISPOT试验检测的是每一个分泌细胞系因子的活化细胞。在培养细胞过程中，任何移动、震动（...

细胞电穿孔转染操作步骤

原代细胞对于细胞转染而言，目前主要是转染试剂(多为脂质体)的天下。磷酸钙转染的方法虽说有些out，但有些细胞还就认准这一套。不过，对于某些淋巴细胞而言，化学方法怎么都不奏效，那我们只能采取强硬手段，用电穿孔的方法进行转染。应用电穿孔时，一般都选择恒定的电容，然后在不同的场强下轰击细胞，以摸索*实验条件。就大多数细胞而言，在电穿孔后能有20-50%的细胞存活率就OK，足以保证DNA的成功转染。电穿孔通常在室温下进行，之后将细胞置于冰上，以延长原代细胞膜孔道开放的时间。与传统的磷...

植物细胞质壁分离技术分析

(1)原代细胞质壁分离法：成长的植物细胞一般具有中央液泡，在中央液泡和细胞壁之间为细胞质的薄层及其内外膜——液泡膜和质膜。液泡中的胞液具有一定的溶质势(或称渗透势)，而活的原生质特别是液泡膜和质膜则具有半透性。所以，当细胞与外界溶液接触时，便与外液构成渗透系统，并可能发生水分的移动。若外液的水势低于胞液的溶质势，则水分外渗的结果可使原生质随着液泡一起收缩而脱离细胞壁，发生质壁分离，质壁分离的细胞与水或水势较高的溶液接触时，可重新吸水而是质壁分离复原。原代细胞实验步骤1、试剂的...

动物细胞培养技术研究开发和工业化

动物细胞培养技术研究开发和工业化动物细胞株（杂交瘤细胞、CHO细胞、昆虫细胞等）大规模培养技术及其生物反应器工程可广泛应用于抗体、基因重组蛋白质药物、病毒疫苗等生物技术产品的研究开发和工业化，长期以来得到国家重大科技攻关计划、863计划等的大力支持，拥有一支精干的研究开发团队和一系列现代化设备仪器，建立了由无血清悬浮培养技术、培养过程及生物反应器设计放大与强化技术、大规模高密度流加和连续灌注培养技术、培养过程计算机实时监测与控制技术、病毒类产品大规模技术等核心技术组成的大规模...

人类体细胞染色体标本制备实验原理和操作步骤

人类体细胞染色体标本制备实验原理和操作步骤实验原理染色体是在显微镜下可见原代细胞有丝分裂过程中出现的结构。因此，必须获得染色体标本才能进行检查分析，通常情况下，都是利用外周血淋巴细胞进行核型分析。正常情况下，人体外周血淋巴细胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞，使其恢复增殖能力。因此，可采取少量外周静脉血，做短期培养，培养至72小时细胞进入增殖旺盛期，此时加入秋水仙素抑制细胞分裂，使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞，经低渗、固定、制...

培养原代细胞时哪些问题需要注意

培养原代细胞时哪些问题需要注意1.原代细胞用1640加10%胎牛血清，有的种系用DMEM.血清要求质量较高，在普通血清中细胞生长不太好。1640用双蒸水溶解，按说明加入碳酸氢钠。2.培养液中应加入HEPES，起缓冲pH值的作用，否则会影响细胞状态。如果用20%的HEPES，每次配培养液时每200ml培养液可加入5ml.加入HEPES后1640培养液颜色略呈橘黄色而非暗红色。3.消化所用胰酶可选择0.125%浓度，且不要消化时间太长。也有研究者认为不用胰酶，直接吹打使细胞脱壁，...