原代细胞培养玻璃器皿的清洗

①原代细胞浸泡：新购进的玻璃器皿常带有灰尘，呈弱碱性，或带有铅、碑等有害物质，故先用自来水浸泡、水洗，然后再用2%~5%盐酸浸泡或煮沸30min，水洗。要领：培养用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能顺利进行。用后的玻璃器皿常带有大量的蛋白质附着，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。②刷洗：用软毛刷、洗涤剂，刷去器皿上的杂质，冲洗晾干。要领：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂去器皿上的杂质、刷洗次太多，会损害器皿的表面光洁度，洗涤剂有使pH上升的趋势，所以易选用软毛...

原代细胞线粒体膜势能的检测

原代细胞线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中zui早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine123、3，3-Dihexyloxacarbocyanineiodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbe...

哺乳动物转录调控原理分析

细胞系RNA聚合酶II是三大RNA聚合酶之一，存在于基因转录装置的核心位置，编码蛋白质基因的转录受到RNA聚合酶的调控。RNA聚合酶解开DNA双链，沿着一条链移动。在移动过程中，它们一边“解读”DNA链上的核苷，一边合成一条相应的RNA链。由PolII合成的RNA就是mRNA，它们将合成蛋白质的指令传给核糖体。过往的研究证实，在许多哺乳动物的多个基因进行转录时，RNAPII往往会在启动子附近的某些特定区域发生停顿。这种停顿往往是发生在RNAPII复合体形成和转录起始之后。而这...

过氧化物酶标记测定法原理

肿瘤细胞原理：脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端,与dATP形成异多聚体,并可与连接了报告酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶)的抗地高辛抗体结合.在适合底物存在下,过氧化物酶可产生很强的颜色反应,特异准确的定位出正在凋亡的细胞,因而可在普通光学显微镜下进行观察.毛地黄植物是地高辛的*来源.在所有动物组织中几乎不存在能与抗地高辛杭体结合的配体,因而非特异性反应很低.抗地高辛的特异性...

新生小鼠颈上交感神经元分散细胞培养

原代细胞交感神经系统在维持机体的正常功能和对环境的适应性反应中起着十分重要的作用。交感神经细胞培养特别有助于神经细胞发育和可塑性研究，利用体外培养系统可进行交感神经细胞的发生、死亡、形态和生化发育、递质表形的获得，以及靶组织与传入纤维的突触形成的研究。此外，通过体外培养系统可获得关于神经营养因子、激素，细胞因子等调节交感神经元发育的信息，了解传入纤维的输入以及与靶组织的的机制。1、材料和方法实验用出生当天的昆明种小鼠，在无菌条件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖镊在解剖显...

常见的细胞因子受体检测的方法介绍

（一）活细胞系吸收试验原理将过量的待测细胞与*细胞因子共孵育，若细胞膜表面存在相应的细胞因子受体即可结合细胞因子，通过测定前、后细胞因子生物活性的对比情况可推测待测细胞表面细胞因子受体是否存在。方法1．过量的待测细胞、适量细胞因子准备。2．共孵育，时间根据待测细胞和细胞因子选择。可设2h,4h,6h,8h和更长时间。3．离心（1500r/min,5分钟）收集上清液。4．测定孵育前后的细胞因子活性。方法同细胞因子测定。注意事项此法简便，适用于定性，但不适用于定量检测。（二）核素...

原代细胞计数的操作步骤

（一）原代细胞计数1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。3、静置3分钟。4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：细胞数/ml＝4大格细胞总数/4×10000注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。（二）原代细胞活力1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中。2、加入0.5ml0.4...

从原培养容器中分离细胞操作流程

细胞系从基层迅速分离细胞，且保持细胞完整性的一般步骤。这一步骤并不意味着对于所有细胞系的广泛应用，每一种系统*条件和施用浓度应该根据经验加以确定。再次培养时检测细胞的活性。细胞的活率应该超过90%对于无血清培养基，降低胰蛋白酶使用量。1.移弃使用过的细胞培养基。2.使用不包含有钙镁的平衡盐溶液或EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸.)清洗细胞系(看表确定正确的清洗溶液)。在培养瓶对着细胞的一面加入清洗溶液，通过转动培养瓶1到2分...