细胞电穿孔转染操作步骤

原代细胞对于细胞转染而言，目前主要是转染试剂(多为脂质体)的天下。磷酸钙转染的方法虽说有些out，但有些细胞还就认准这一套。不过，对于某些淋巴细胞而言，化学方法怎么都不奏效，那我们只能采取强硬手段，用电穿孔的方法进行转染。应用电穿孔时，一般都选择恒定的电容，然后在不同的场强下轰击细胞，以摸索*实验条件。就大多数细胞而言，在电穿孔后能有20-50%的细胞存活率就OK，足以保证DNA的成功转染。电穿孔通常在室温下进行，之后将细胞置于冰上，以延长原代细胞膜孔道开放的时间。与传统的磷...

植物细胞质壁分离技术分析

(1)原代细胞质壁分离法：成长的植物细胞一般具有中央液泡，在中央液泡和细胞壁之间为细胞质的薄层及其内外膜——液泡膜和质膜。液泡中的胞液具有一定的溶质势(或称渗透势)，而活的原生质特别是液泡膜和质膜则具有半透性。所以，当细胞与外界溶液接触时，便与外液构成渗透系统，并可能发生水分的移动。若外液的水势低于胞液的溶质势，则水分外渗的结果可使原生质随着液泡一起收缩而脱离细胞壁，发生质壁分离，质壁分离的细胞与水或水势较高的溶液接触时，可重新吸水而是质壁分离复原。原代细胞实验步骤1、试剂的...

动物细胞培养技术研究开发和工业化

动物细胞培养技术研究开发和工业化动物细胞株（杂交瘤细胞、CHO细胞、昆虫细胞等）大规模培养技术及其生物反应器工程可广泛应用于抗体、基因重组蛋白质药物、病毒疫苗等生物技术产品的研究开发和工业化，长期以来得到国家重大科技攻关计划、863计划等的大力支持，拥有一支精干的研究开发团队和一系列现代化设备仪器，建立了由无血清悬浮培养技术、培养过程及生物反应器设计放大与强化技术、大规模高密度流加和连续灌注培养技术、培养过程计算机实时监测与控制技术、病毒类产品大规模技术等核心技术组成的大规模...

人类体细胞染色体标本制备实验原理和操作步骤

人类体细胞染色体标本制备实验原理和操作步骤实验原理染色体是在显微镜下可见原代细胞有丝分裂过程中出现的结构。因此，必须获得染色体标本才能进行检查分析，通常情况下，都是利用外周血淋巴细胞进行核型分析。正常情况下，人体外周血淋巴细胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞，使其恢复增殖能力。因此，可采取少量外周静脉血，做短期培养，培养至72小时细胞进入增殖旺盛期，此时加入秋水仙素抑制细胞分裂，使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞，经低渗、固定、制...

培养原代细胞时哪些问题需要注意

培养原代细胞时哪些问题需要注意1.原代细胞用1640加10%胎牛血清，有的种系用DMEM.血清要求质量较高，在普通血清中细胞生长不太好。1640用双蒸水溶解，按说明加入碳酸氢钠。2.培养液中应加入HEPES，起缓冲pH值的作用，否则会影响细胞状态。如果用20%的HEPES，每次配培养液时每200ml培养液可加入5ml.加入HEPES后1640培养液颜色略呈橘黄色而非暗红色。3.消化所用胰酶可选择0.125%浓度，且不要消化时间太长。也有研究者认为不用胰酶，直接吹打使细胞脱壁，...

造血干细胞的基本特性

造血干细胞的基本特性造血干细胞的多向分化潜能使造血干细胞分化为各类祖细胞系,祖细胞又可以分化为各种类型的血细胞。在造血干细胞发育、成熟的过程中,除了分化为成熟的细胞,部分细胞会衰老、死亡。为了维持终生造血,造血干细胞会不断地进行自我更新。但是在一次次的DNA复制和细胞分裂中又增加了突变的可能。在成体中,70%的HSC处于静息状态,这种状态可使终生存在的造血干细胞可以尽可能减少由于增殖带来的基因组不稳定性,降低细胞应激带来的伤害。当造血干细胞受到信号刺激时,静息的造血干细胞就会...

杂交瘤细胞技术分析

杂交瘤细胞技术分析克隆化的细胞可以在体外进行大量培养，收集上清液而获得大量的单一的克隆化抗体。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细胞浓度，且每天要换培养液。而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小鼠（无胸腺的裸鼠），杂交瘤细胞就开始无限地繁殖，直至宿主死亡。产生肿瘤细胞的小鼠腹水和血清中含有大量的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，这种抗体的效价往往高于培养细胞上清液...

体外培养的细胞系差异和分化

体外培养的细胞系差异和分化1、差异：细胞系离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。虽然体外细胞与机体细胞存...