原代细胞克隆形成试验

概念：原代细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。基本步骤：1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL37℃预温培养液...

细胞株组织修复

细胞株在一项有望让这种干细胞疗法开发更加容易的研究中，来自麻省理工学院（MIT）和新加坡-麻省理工学院学术联盟（SMART）的一个研究小组，已经确定了MSCs的三个物理特性，利用这些特性，可以将其与骨髓中存在的其他免疫细胞区分开来。基于这些信息，他们计划一种能够快速分离MSCs的设备，使我们更容易地产生足够干细胞用于患者治疗。直到现在，仍然还没有很好的方法，能够从已经开始分化成其他细胞类型、但是细胞表面共有相同分子的骨髓细胞中分离MSCs。本文资深作者、MIT材料科学与工程、...

培养原代细胞的冻存步骤

原代细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。1．冻存细胞（1）选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前1d换液。（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×107／ml左右密度，离心，去上清。（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO1ml，5.6%NaHCO30.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存...

原代细胞间的甲基化变异如何解析？

原代细胞具有非常高的异质性，在胚胎干细胞群体中不同的子群具有不同的细胞状态，并在基因表达、转录因子调控及表观遗传修饰方面均表现出广泛的差异。异质的DNA甲基化在平衡ESCs自我更新和多分化潜能之间具有重要作用，因此细胞间DNA甲基化异质性的研究对于理解胚胎干细胞生物学问题十分重要。近年来，单细胞测序技术已经成为研究复杂组织中细胞间甲基化异质性的有力工具，但怎样分析并解释单细胞间的甲基化变异仍具有很大挑战。中国科学院北京基因组所吕雪梅研究组与美国弗吉尼亚理工大学谢荷煌研究团队合...

分享细胞系的生命周期

细胞系原代培养是从体内取出组织细胞开始培养到*次进行传代之前的时期，是一个特征性的必然的生长阶段，完成了从体内到体外环境的过度和适应过程，恢复了分裂增殖与生长发育的能力。其性状似体内，可表达某些形态、结构、更能，更能代表活体细胞zui接近在体使的情况传代期--细胞系：将原代培养物经过分割，重新接种到两个或两个以上的器皿内进行培养，进入传代培养期，是整个培养过程的主要时期。原代培养物要经过反复传代，传代培养期要经过反复传代。传代培养期并不单指培养物经传代后的*代培养过程，而是指...

原代细胞扩展应用

这种新的原代细胞提取方法是基于ETH过去几年开发出的一种微注射系统，即FluidFM，它是“世界上zui小的自动注射器”。这已经给生物学家提供一种将物质注射到单个细胞内的方法。FluidFM和它的纳米注射器也适合通过负压轻轻地吸附细胞，然后将它们重新安置在其他的地方。Vorholt教授和他的研究团队对这种微注射系统进行进一步改进，从而也允许从细胞区室中提取出物质。Guillaume-Gentil评论道，“一个特别重要的方面是为这种微针找到合适的涂层以便防止被细胞物质污染。”另...

原代细胞融合实验步骤

实验方法原理原代细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendaivirus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和电脉冲。目前应用zui广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不*清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。实验材料鸡红细胞试剂、试剂盒PEGHanks液仪器、耗材显微镜离心机水浴箱离心管试管载玻璃片盖玻片实验步骤1.取新鲜鸡血以0.85%生理盐水制成10%的悬液。2.称取0.5...

原代细胞培养目的与用途

1、原代细胞科学研究：药物研究开发与基础研究药物研究与开发(1)新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。(2)疫苗研究与开发：如病毒性疫苗的研究与开发（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。(3)基因工程药物研究与开发：如干扰素研究与开发，细胞生长因子研究与开发等。(4)细胞工程药物研究与开发：生物活性多肽研究与开发，人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。(5)单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体，治疗用单克隆抗体。基础研究(1)药物作...