原代细胞融合实验步骤

实验方法原理原代细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendaivirus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和电脉冲。目前应用zui广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不*清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。实验材料鸡红细胞试剂、试剂盒PEGHanks液仪器、耗材显微镜离心机水浴箱离心管试管载玻璃片盖玻片实验步骤1.取新鲜鸡血以0.85%生理盐水制成10%的悬液。2.称取0.5...

原代细胞培养目的与用途

1、原代细胞科学研究：药物研究开发与基础研究药物研究与开发(1)新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。(2)疫苗研究与开发：如病毒性疫苗的研究与开发（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。(3)基因工程药物研究与开发：如干扰素研究与开发，细胞生长因子研究与开发等。(4)细胞工程药物研究与开发：生物活性多肽研究与开发，人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。(5)单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体，治疗用单克隆抗体。基础研究(1)药物作...

肿瘤细胞染色体数目异常的原因

肿瘤细胞分裂是指细胞分裂为两个相同副本的过程。普通人的一生中要经历无数次的这一过程。为了生成两个*相同的副本，细胞必须地分离它们的染色体，这一事件依赖于称之为动粒（kinetochore）的专门结构将染色体双向附着到纺锤体微管上。在细胞分裂的早期阶段，动粒结合纺锤体微管会发生许多的错误。正常的细胞能够有效地纠正这些错误，确保染色体正确分离。而癌细胞通常不会纠正这些错误，使得子细胞染色体数目异常，从而帮助这些癌细胞抵抗化疗。在这项新研究中LilianKabeche博士和Duan...

原代细胞培养有哪些经验和教训

原代细胞严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换（灭菌水加进去）。的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。别怕浪费。枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来。。。刚开始的时候吹细胞...

原代细胞的稳定性

除非原代细胞产品说明书上另有特别说明，否则所有PeproTech蛋白产品都为冻干粉形式，在室温下也能保持很好的稳定性。但是，我们推荐冻干产品保存于-20℃。大多数冻干产品经溶解和稀释后，可短时间保存于4℃；若要进行较长时间保存，我们建议稀释到工作液浓度并加入一定的carrierprotein（如0.1%BSA），然后分装保存于-20℃。请注意每一次冻融过程都会造成蛋白的部分变性，应避免反复冻融。重组细胞因子的交叉活性除了少数例外，大多数人类细胞因子对小鼠细胞都有活性。许多小鼠...

原代细胞冻存是保存的主要方法之一

原代细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于一196~C液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内...

原代细胞的透过性

原代细胞的选择透过性：这种膜可以让水分子自由通过，细胞要选择吸收的离子和小分子（如：氨基酸、葡萄糖）也可以通过，而其它的离子、小分子和大分子（如：信使RNA、蛋白质、核酸、蔗糖）则不能通过。膜蛋白：指细胞内各种膜结构中蛋白质成分。载体蛋白：膜结构中与物质运输有关的一种跨膜蛋白质，细胞膜中的载体蛋白在协助扩散和主动运输中都有特异性。细胞质：在细胞膜以内、细胞核以外的原生质，叫做细胞质。细胞质主要包括细胞质基质和细胞器。细胞质基质：细胞质内呈液态的部分是基质。是细胞进行新陈代谢的...

细胞系自动化筛选技术

zui常用的细胞系方法是检测96孔细胞培养板中蛋白的浓度；另外一个方法是让细胞在软琼脂上生长形成集落，然后利用原位免疫沉淀技术获得高产细胞。近年来，发展起来的高通量自动化筛选技术也被受关注。为实现克隆的高表达，在有些情况下外源基因扩增，比如以CHO用作宿主细胞；有些情况则不需要，比如杂交瘤细胞。为了实现外源基因的扩增，将细胞在高浓度的扩增标记（比如dhfr）抑制剂的压力下生长。细胞存活需要扩增标记。高浓度的抑制剂能够杀死除拥有多个扩增标记基因以外的绝大多数细胞。在标记基因扩增...