原代细胞如何消除组织培养的污染

原代细胞当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。①在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规原代细胞传代的浓度。...

哪些方法可以使细胞适应无血清培养基

1．细胞株直接适应法式—将细胞直接从添加血清的培养基转换到无血清培养基中。2．连续适应或循序隔绝法—分几步将细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基中。与直接适应法相比较，连续适应法对于细胞更温和些。为了使细胞适应无血清培养基，关键是细胞培养应满足以下条件：1．处于对数生长中期2．存活率大于90%3．在适应期间，以较高的初始细胞株接种量进行接种下面列出了常规适应步骤。初始细胞接种量、细胞产量和培养周期是连续优化的良好开端。直接适应有些类型的细胞可以直接从含有血清培养基适应无血...

干细胞过滤器的产品优势

干细胞过滤器是一种用于细胞过滤和分离的微流体器件。本产品由一个封闭的流体通道作为细胞过滤器腔体，1、在细胞过滤器腔体的两端设有流体的输入端口；2、和流体输出端口；3、在流体的输入端口和流体输出端口之间设置细胞过滤装置即细胞颗粒阻挡器；4、在细胞颗粒阻挡器旁为流体池；5、细胞阻挡结构可阻挡流体中较大的细胞，并使之聚集在流体池中，并被流体池中的相关抗体所捕获。通过外加的物理或化学作用，使其破碎或灭活，达到细胞过滤的作用。干细胞产品说明：尼龙网格大小为40微米、70微米以及100微...

不同细胞培养基的除菌方式及注意事项

细胞系培养基灭菌的方式分为高压灭菌和膜过滤除菌，不同的培养基由于其营养成份不同，灭菌方式也可能不同。绝大多数细胞培养基不适宜高压灭菌。因为高压灭菌易破坏细胞培养基中的一些成份，如某些维生素等，因此，在通常的高压灭菌型细胞培养基中，配方中的维生素种类与过滤型培养基相比较少，对于细胞系生长*的谷氨酰胺等，需待高压后补充到培养基中。在高压过程中，灭菌用器皿的选择应注意避免蒸发或是污染。在大规模工业化中，可以采用短时超高温处理的方法进行流水线式的灭菌，能够提高自动化效率，降低成本。膜...

人外周T细胞的分离与鉴定

材料：淋巴细胞株悬液、1%SRBC悬液、灭活之小牛血清、离心管、试管、吸管、载玻片、0.8%戊二醛、瑞氏染液。方法（1）取上述配好之淋巴细胞悬液0.1ml于洁净小试管中，加入1%SRBC悬液0.1ml。再加入小牛血清0.1ml，混匀，置37℃水浴箱中5分钟，500转/分，离心5分钟，放4℃冰箱2-24小时。（2）从冰箱中取出试管，留适量上清液，轻轻摇匀，加0.8%戊二醛2滴，轻摇后，置4℃冰箱15分钟，取出，作成涂片，待自然干燥，以瑞氏染液染色。（3）计数：镜下观察，凡结合三...

原代细胞培养实验器具清洗步骤

原代细胞实验器具清洗l玻璃类1、主要有：培养瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，离心管，试管，培养皿等。2、清洗步骤：泡在含有洗洁净的自来水中→捞出来用毛刷将实验器具各个面刷洗至少25遍→自来水冲洗25遍→过一遍一蒸水→泡入铬酸,过夜(24h左右)→从铬酸中捞出器具，自来水冲洗25遍→过三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱内烘干→收入柜子备用→用前高温灭菌(121℃，25min)→烘干→使用。注意：新的玻璃器具先要泡盐酸1天，然后清洗步骤与上面相同。l塑料类1塑料类器具主要包括：孔板，大枪头...

影响哺乳动物细胞复苏的因素

影响哺乳动物原代细胞复苏的因素包括：（a）细胞类型，（b）生长阶段，（c）细胞处于细胞周期的哪个阶段，（d）终悬液中的细胞数量和浓度。可通过优化以上因素来提高复苏细胞活力，另外，还需考虑冻存保护剂的特性以及冻存过程的具体操作。哺乳动物细胞培养对其他细胞和微生物的污染特别敏感，例如Hela细胞。由于这种特性，初始细胞系可通过同工酶分析、染色体组型分析、免疫分析或基因组分析，检测来源。冻存前后均应该进行如上检测。特别需要注意的是，病毒和支原体污染。一套完整健全的哺乳动物细胞系鉴定...

神经细胞分散培养

（一）细胞系选材常用胚胎动物或新生鼠神经组织。鸡胚常用胚龄6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不过也有认为与组织相关。如大白鼠胚胎以19d为宜，小鼠以18d为宜，大鼠纹状体以10d为宜；若纹状体与黑质联合培养的大鼠胚，则黑质以13d，纹状体18-21d为宜；小脑以20-21d小鼠胚胎，所获蒲氏细胞成活率高，颗粒细胞正在分化；脊髓与DRG联合培养，常用4-7d鸡胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神经成活率高。（二）取材。脑则取出相应组织，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消...