细胞培养技术注意事项

1.原代细胞实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、...

原代细胞复苏技术

1.原代细胞冻存复苏技术简介在ELISPOT检测的应用中，往往需要用到冻存的淋巴细胞样品作为检测细胞。由于ELISPOT检测的是细胞的免疫功能，不仅仅需要保持细胞的存活率，而且还要保证细胞的功能不发生变化。传统的细胞冻存方法通常是为了保存细胞株，对细胞存活率的要求不高，更没考虑保持细胞原有的免疫状态，所以传统的细胞冻存方法已经不能满足ELISPOT检测的要求。参见图7.1。考虑到ELISPOT检测的特殊性，荷兰U-CyTech公司经过精心的研究与反复的验证，推出了Cryost...

细胞常见的保存方法

原代细胞保存温度越低，保存时限更长；温度越低，对细胞伤害越大；低温也不怕，我有防冻剂（e.g.甘油）。下面的表格就是五种常见保存细菌细胞的方法和大约时限。保存条件温度°C大约时间琼脂平板44-6周（AgarPlate）穿刺培养基43周-1年（stabculture）冰冻-201-3年超低温冰冻-201-10年冻干≤415年+但是，具体到你用的那一种菌用什么方法保存能够保存多长时间，就要视情况而定了，并没有一个*答案，上表中所列出来的时限一般来说是适用大部分细菌样本的。小编如果...

细胞同步化实验操作步骤

在肿瘤细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中。不同时相的细胞对药物干预存在不同的反应，会影响实验的重复性，因此需要制备细胞周期一致的细胞。细胞同步化是解决该问题的好办法。细胞同步化是利用药物或其他方法使细胞停止在细胞周期的某个时相的技术，其基本原则是使细胞停留在细胞周期的特定时相上；停滞过程可以通过调节，恢复细胞周期；恢复后所有细胞以一致的步调在细胞周期中运行。细胞同步化实验为特定细胞周期转变、细胞动力学、细胞周期调控以及细胞在不同时相中对药物的敏感性研究奠定了基础。...

细胞悬液标本制备实验步骤

细胞系悬液标本制备实验步骤(1)取材：收集对数生长期细胞于离心管中，800～1000r／min离心10min，弃上清，弹指法混匀细胞。沿管壁加入2．0％～2．5％冷戊二醛，轻轻吹打，4℃固定30min。用小铝片将细清。4℃PBS缓冲液冲洗1～2h或过夜，1000r／min离心5min，弃上清。(2)制备预包埋块：管内加入2％～4％37℃琼脂糖液0．1～0．5ml，两手搓离心管，使细胞系与琼脂糖混匀，室温冷却，形成细胞琼脂凝胶预包埋块。离心管内加适量PBs缓冲液或75％乙醇溶液...

原代细胞培养注意事项

原代细胞培养：1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。2、无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。人支气管上皮细胞微小RNA英文名称：HBEpiCmiRNA规格:1µg2µg5&...

肿瘤细胞冻存保护剂

肿瘤细胞很多化合物都可以作为冻存保护剂，它们既可以单独使用也可以联合使用，例如糖、血清和去污剂。虽然冻存没有的准则，但是大家普遍认为二甲基亚砜（DMSO）和甘油是保护活细胞和组织使用zui广泛且zui有效的冻存保护剂。其他冻存保护剂可根据情况使用，可单独使用也可联合使用，包括：聚乙烯乙二醇（polyethyleneglycol），丙烯乙二醇（propyleneglycol），甘油（glycerine），聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrolidone），山梨醇（sorb...

人类外周血淋巴细胞的培养方法

实验原理染色体是在显微镜下可见细胞系有丝分裂过程中出现的结构。因此，必须获得染色体标本才能进行检查分析，通常情况下，都是利用外周血淋巴细胞进行核型分析。正常情况下，人体外周血淋巴细胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞，使其恢复增殖能力。因此，可采取少量外周静脉血，做短期培养，培养至72小时细胞进入增殖旺盛期，此时加入秋水仙素抑制细胞分裂，使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞，经低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。上述制备的染...