肿瘤细胞冻存保护剂

肿瘤细胞很多化合物都可以作为冻存保护剂，它们既可以单独使用也可以联合使用，例如糖、血清和去污剂。虽然冻存没有的准则，但是大家普遍认为二甲基亚砜（DMSO）和甘油是保护活细胞和组织使用zui广泛且zui有效的冻存保护剂。其他冻存保护剂可根据情况使用，可单独使用也可联合使用，包括：聚乙烯乙二醇（polyethyleneglycol），丙烯乙二醇（propyleneglycol），甘油（glycerine），聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrolidone），山梨醇（sorb...

人类外周血淋巴细胞的培养方法

实验原理染色体是在显微镜下可见细胞系有丝分裂过程中出现的结构。因此，必须获得染色体标本才能进行检查分析，通常情况下，都是利用外周血淋巴细胞进行核型分析。正常情况下，人体外周血淋巴细胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞，使其恢复增殖能力。因此，可采取少量外周静脉血，做短期培养，培养至72小时细胞进入增殖旺盛期，此时加入秋水仙素抑制细胞分裂，使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞，经低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。上述制备的染...

细胞长期保存的方法

细胞系长期低温冰冻必然会导致部分细胞死亡，而且很多时候我们要把细胞样本拿来重新接种做实验，所以解冻再冻的过程也会导致细胞死亡。那么起始样本的细胞浓度就要达到一定的高度，这样在以后保存的过程中就算死亡一些细胞，我们也还有很多有效细胞可以用，一般来说这个起始细胞密度要达到10的七次方的样子（单位：细胞/mL）。除了常见抗冻剂甘油外，我们也会添加多糖（polysaccharide）或者葡聚糖（dextran）或某些蛋白质用来吸附在细胞表面形成保护薄膜，防止在冷冻过程中对细胞的破坏。...

原代细胞培养过程可能出现的问题及解决办法

原代细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞不贴壁、生长缓慢、生长不好，甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞不贴壁可能原因：●胰蛋白酶消化过度●支原体污染●培养基pH值过碱（NaHCO3分解）●细胞老化●接种细胞起始浓度太低或太高解决方法：●缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度●分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。●使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2●启用新的保...

细胞株培养时消毒灭菌的方法

细胞株严格的消毒灭菌对保证细胞培养的成功是极为重要的，其方法分为物理法和化学法两类。前者包括干热、湿热、滤过、紫外线及射线等，后者主要指使用化学消毒剂等。①热灭菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。②蒸气灭菌：用于玻璃器皿、滤器橡胶塞、解剖用具、耐热塑料器具、受热不变性的溶液等，不同物品其有效灭菌压力和时间不同，如培养用液、橡胶制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高压灭菌10min;布类、玻璃制品、金属器械等用103kPa(121....

ATCC细胞株解冻和培养操作推荐

冻存的ATCC细胞株和杂交腐细胞株在运送过程中使用干冰保持低温。收到细胞后，可以立即解冻复苏，去除二甲基亚砜（DSMO0）后进行细胞培养。如果不立即复苏培养细胞，必须将细胞冻存管放置于液氮罐气相层储存。请不要将细胞存储在-130℃以上的温度。如果温度不够低，达不到-130℃，细胞活力会立即下降。ATCC细胞株产品附带一份产品资料单，其中包含细胞株的信息和详细的操作指南。细胞株的所有详细介绍可以在ATCC找到，产品资料单也可以在ATCC下载。此外产品还附带细胞株具体批次的检测报...

原代细胞保存的主要方法之一细胞冻存

利用冻存技术将原代细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5％．15％的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细...

原代细胞培养基的保存方法分析

原代细胞培养基的保存方法分析1.干粉，买了后一定要保存在4度。有人保存在-20度我认为没有必要。但4度是非常必要的。保证期是有提示的。2.配好的无血清培养基一定保存在4度，保存不要超过3个月。用时根据提示要加入谷胺酰胺。3.加入血清的培养基，保存在4度不要超过1个月，从时间太长，活性下降。当然稍微长点也不一定出问题。但是根据细胞而定;如果原代培养，新鲜，如果是原代细胞，或仅维持传代就不太要紧。但是原则是越新越好。786-O[786-0],人肾透明腺癌细胞HumanHEC-1A...