肿瘤细胞培养方法

肿瘤细胞培养成功关键在于：取材、成纤维细胞的排除、选用适宜的培养液和培养底物等几个方面。在具体培养方法方面，肿瘤细胞培养与正常组织细胞培养并无原则差别，初代培养应用组织块和消化培养法均可。1、取材：人肿瘤细胞来自外科手术或活检瘤组织。取材部位非常重要，体积较大的肿瘤组织中有退变或坏死区，取材时尽量避免用退变组织，要挑选活力较好的部位。癌性转移淋巴结或胸腹水是好的培养材料。取材后宜尽快进行培养，如因故不能立即培养，可贮存于4℃中，但不宜栽过24小时。2、培养基：肿瘤细胞对培养基...

应用细胞融合技术制备染色体

原代细胞实验目的通过细胞融合技术，初步了解染色体提前凝集标本制备原理、方法及间期细胞三种时相的提前凝集染色体特点。【实验用品】一、材料人宫颈癌上皮细胞(HeLa细胞)二、器材和仪器显微镜、离心机、水浴箱、热吹风机、10ml刻度离心管、5(1/2)针头注射器、试管架、染色槽、废液缸、吸水纸、擦镜纸、冰冻载玻片、香柏油瓶、记号笔、酒精灯。三、试剂50％PEG、Hanks液(pH7.4)、RPMI一1640培养基(含10％灭活小牛血清，pH7.4)10μg／ml秋水仙素，0.075...

细胞培养过程中添加剂起到的作用

肿瘤细胞能量来源：谷氨酰胺L－谷氨酰胺是一种氨基酸，细胞的重要能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。同时L-谷氨酰胺不稳定，在中性的水溶液中会自发降解；降解产物对细胞有毒性（对干细胞，原代细胞影响尤其大）。能影响细胞活性、蛋白表达水平及糖基化模式等。那如何解决呢？方案有二：选择不含谷氨酰胺的培养基，自己添加选择稳定的谷氨酰胺替代物经过科学家不断努力，终于找到了稳定的谷氨酰胺替代物：glutaGRO。它有何方功能呢？原来，它是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺缩合形成的二肽，稳定性...

细胞培养技术注意事项

1.原代细胞实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、...

原代细胞复苏技术

1.原代细胞冻存复苏技术简介在ELISPOT检测的应用中，往往需要用到冻存的淋巴细胞样品作为检测细胞。由于ELISPOT检测的是细胞的免疫功能，不仅仅需要保持细胞的存活率，而且还要保证细胞的功能不发生变化。传统的细胞冻存方法通常是为了保存细胞株，对细胞存活率的要求不高，更没考虑保持细胞原有的免疫状态，所以传统的细胞冻存方法已经不能满足ELISPOT检测的要求。参见图7.1。考虑到ELISPOT检测的特殊性，荷兰U-CyTech公司经过精心的研究与反复的验证，推出了Cryost...

细胞常见的保存方法

原代细胞保存温度越低，保存时限更长；温度越低，对细胞伤害越大；低温也不怕，我有防冻剂（e.g.甘油）。下面的表格就是五种常见保存细菌细胞的方法和大约时限。保存条件温度°C大约时间琼脂平板44-6周（AgarPlate）穿刺培养基43周-1年（stabculture）冰冻-201-3年超低温冰冻-201-10年冻干≤415年+但是，具体到你用的那一种菌用什么方法保存能够保存多长时间，就要视情况而定了，并没有一个*答案，上表中所列出来的时限一般来说是适用大部分细菌样本的。小编如果...

细胞同步化实验操作步骤

在肿瘤细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中。不同时相的细胞对药物干预存在不同的反应，会影响实验的重复性，因此需要制备细胞周期一致的细胞。细胞同步化是解决该问题的好办法。细胞同步化是利用药物或其他方法使细胞停止在细胞周期的某个时相的技术，其基本原则是使细胞停留在细胞周期的特定时相上；停滞过程可以通过调节，恢复细胞周期；恢复后所有细胞以一致的步调在细胞周期中运行。细胞同步化实验为特定细胞周期转变、细胞动力学、细胞周期调控以及细胞在不同时相中对药物的敏感性研究奠定了基础。...

细胞悬液标本制备实验步骤

细胞系悬液标本制备实验步骤(1)取材：收集对数生长期细胞于离心管中，800～1000r／min离心10min，弃上清，弹指法混匀细胞。沿管壁加入2．0％～2．5％冷戊二醛，轻轻吹打，4℃固定30min。用小铝片将细清。4℃PBS缓冲液冲洗1～2h或过夜，1000r／min离心5min，弃上清。(2)制备预包埋块：管内加入2％～4％37℃琼脂糖液0．1～0．5ml，两手搓离心管，使细胞系与琼脂糖混匀，室温冷却，形成细胞琼脂凝胶预包埋块。离心管内加适量PBs缓冲液或75％乙醇溶液...