构建人类原始原代细胞

这是*次成功将人类原代细胞编程至这样的早期发育阶段。这项研究有可能帮助找到有关一些生育问题病因的答案，生成关于胚胎发育zui早期的一些新见解，并有潜力在未来促使开发出新型的生殖技术。多年来研究人员一直试图在培养皿中构建出人类原始生殖细胞。原始生殖细胞生成于胚胎发育的zui初几个星期里，此时受精卵中的胚胎干细胞开始分化为这一非常基础的细胞类型。一旦这些原始生殖细胞变为‘特化’细胞，它们会‘几乎自发’地继续朝着精子或卵子前体细胞发育。诱导多能干(iPS)细胞的诞生促使科学家们提出...

肿瘤细胞培养成纤维细胞排除法

肿瘤细胞刮除法：是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头（用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝）、或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用（也可用特制电热烧灼器刮除）。刮除程序为：（1）标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位；（2）刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间；（3）用Hanks液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞；（4）注入培养液继续培养，如发现仍有成纤维细胞残留，可重复刮除至*除掉为止2．反复贴壁法：根据肿瘤细胞比成纤维细...

正确复苏原代细胞的方法

原代细胞冻存好了，接下来要注意什么问题呢?没错，就是记得到时间了，拿出来复苏。那么，细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢?细胞活力和形态检查的作用何在?请看下文：活力检查–千万不要使用不健康的细胞，可能有污染，如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!形态检查–检查细胞的固有形态和生长行为。冻存细胞：补充新的培养液–在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。在细胞长至70%单层时收获细胞，计数活细胞数，用冻存液调整细胞密度~5x106cells/ml(根据不同的细胞类型调整)冻存液–用冻...

如何使细胞培养物快速适应无血清培养基？

许多原代细胞系容易适应无血清培养基和无蛋白培养基，而对环境要求过高的其它细胞却难以适应变化，这就需要更为专业的方法来适应变化。而根据细胞系的特性，有两种方法可使细胞适应无血清培养基。*种方法是连续适应/循序隔绝法；另一种方法是直接适应。一、连续适应/循序隔绝法*种方法是连续适应/循序隔绝法。通过一系列的血清还原步骤，使细胞适应无血清培养基。这是优先选用的方法，且不对细胞培养环境形成太过恶劣的变化。连续适应/循序隔绝法——方法1使原培养基内的细胞连续地经过以下几个阶段：阶段1：...

兔食管上皮细胞培养步骤

原代细胞实验材料：1.大兔的正常食管组织2.6孔培养板：用多聚赖氨酸4℃包被过夜3.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.44.手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊实验方法：1.处死大兔，取正常食管组织放入含双抗的PBS（pH=7.2）中反复清洗3次，以洗去组织表面的血丝及粘液；2.小心的用眼科剪镊将食管黏膜与黏膜下组织分离；3.分离出的粘膜组织用含双抗的PBS（pH=7.2）反复冲洗若...

肿瘤细胞培养方法

肿瘤细胞培养成功关键在于：取材、成纤维细胞的排除、选用适宜的培养液和培养底物等几个方面。在具体培养方法方面，肿瘤细胞培养与正常组织细胞培养并无原则差别，初代培养应用组织块和消化培养法均可。1、取材：人肿瘤细胞来自外科手术或活检瘤组织。取材部位非常重要，体积较大的肿瘤组织中有退变或坏死区，取材时尽量避免用退变组织，要挑选活力较好的部位。癌性转移淋巴结或胸腹水是好的培养材料。取材后宜尽快进行培养，如因故不能立即培养，可贮存于4℃中，但不宜栽过24小时。2、培养基：肿瘤细胞对培养基...

应用细胞融合技术制备染色体

原代细胞实验目的通过细胞融合技术，初步了解染色体提前凝集标本制备原理、方法及间期细胞三种时相的提前凝集染色体特点。【实验用品】一、材料人宫颈癌上皮细胞(HeLa细胞)二、器材和仪器显微镜、离心机、水浴箱、热吹风机、10ml刻度离心管、5(1/2)针头注射器、试管架、染色槽、废液缸、吸水纸、擦镜纸、冰冻载玻片、香柏油瓶、记号笔、酒精灯。三、试剂50％PEG、Hanks液(pH7.4)、RPMI一1640培养基(含10％灭活小牛血清，pH7.4)10μg／ml秋水仙素，0.075...

细胞培养过程中添加剂起到的作用

肿瘤细胞能量来源：谷氨酰胺L－谷氨酰胺是一种氨基酸，细胞的重要能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。同时L-谷氨酰胺不稳定，在中性的水溶液中会自发降解；降解产物对细胞有毒性（对干细胞，原代细胞影响尤其大）。能影响细胞活性、蛋白表达水平及糖基化模式等。那如何解决呢？方案有二：选择不含谷氨酰胺的培养基，自己添加选择稳定的谷氨酰胺替代物经过科学家不断努力，终于找到了稳定的谷氨酰胺替代物：glutaGRO。它有何方功能呢？原来，它是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺缩合形成的二肽，稳定性...