细胞同步化实验操作步骤

在肿瘤细胞培养过程中，细胞多处于不同的细胞周期时相中。不同时相的细胞对药物干预存在不同的反应，会影响实验的重复性，因此需要制备细胞周期一致的细胞。细胞同步化是解决该问题的好办法。细胞同步化是利用药物或其他方法使细胞停止在细胞周期的某个时相的技术，其基本原则是使细胞停留在细胞周期的特定时相上；停滞过程可以通过调节，恢复细胞周期；恢复后所有细胞以一致的步调在细胞周期中运行。细胞同步化实验为特定细胞周期转变、细胞动力学、细胞周期调控以及细胞在不同时相中对药物的敏感性研究奠定了基础。...

细胞悬液标本制备实验步骤

细胞系悬液标本制备实验步骤(1)取材：收集对数生长期细胞于离心管中，800～1000r／min离心10min，弃上清，弹指法混匀细胞。沿管壁加入2．0％～2．5％冷戊二醛，轻轻吹打，4℃固定30min。用小铝片将细清。4℃PBS缓冲液冲洗1～2h或过夜，1000r／min离心5min，弃上清。(2)制备预包埋块：管内加入2％～4％37℃琼脂糖液0．1～0．5ml，两手搓离心管，使细胞系与琼脂糖混匀，室温冷却，形成细胞琼脂凝胶预包埋块。离心管内加适量PBs缓冲液或75％乙醇溶液...

原代细胞培养注意事项

原代细胞培养：1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。2、无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。人支气管上皮细胞微小RNA英文名称：HBEpiCmiRNA规格:1µg2µg5&...

肿瘤细胞冻存保护剂

肿瘤细胞很多化合物都可以作为冻存保护剂，它们既可以单独使用也可以联合使用，例如糖、血清和去污剂。虽然冻存没有的准则，但是大家普遍认为二甲基亚砜（DMSO）和甘油是保护活细胞和组织使用zui广泛且zui有效的冻存保护剂。其他冻存保护剂可根据情况使用，可单独使用也可联合使用，包括：聚乙烯乙二醇（polyethyleneglycol），丙烯乙二醇（propyleneglycol），甘油（glycerine），聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrolidone），山梨醇（sorb...

人类外周血淋巴细胞的培养方法

实验原理染色体是在显微镜下可见细胞系有丝分裂过程中出现的结构。因此，必须获得染色体标本才能进行检查分析，通常情况下，都是利用外周血淋巴细胞进行核型分析。正常情况下，人体外周血淋巴细胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞，使其恢复增殖能力。因此，可采取少量外周静脉血，做短期培养，培养至72小时细胞进入增殖旺盛期，此时加入秋水仙素抑制细胞分裂，使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞，经低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。上述制备的染...

细胞长期保存的方法

细胞系长期低温冰冻必然会导致部分细胞死亡，而且很多时候我们要把细胞样本拿来重新接种做实验，所以解冻再冻的过程也会导致细胞死亡。那么起始样本的细胞浓度就要达到一定的高度，这样在以后保存的过程中就算死亡一些细胞，我们也还有很多有效细胞可以用，一般来说这个起始细胞密度要达到10的七次方的样子（单位：细胞/mL）。除了常见抗冻剂甘油外，我们也会添加多糖（polysaccharide）或者葡聚糖（dextran）或某些蛋白质用来吸附在细胞表面形成保护薄膜，防止在冷冻过程中对细胞的破坏。...

原代细胞培养过程可能出现的问题及解决办法

原代细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞不贴壁、生长缓慢、生长不好，甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞不贴壁可能原因：●胰蛋白酶消化过度●支原体污染●培养基pH值过碱（NaHCO3分解）●细胞老化●接种细胞起始浓度太低或太高解决方法：●缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度●分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。●使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2●启用新的保...

细胞株培养时消毒灭菌的方法

细胞株严格的消毒灭菌对保证细胞培养的成功是极为重要的，其方法分为物理法和化学法两类。前者包括干热、湿热、滤过、紫外线及射线等，后者主要指使用化学消毒剂等。①热灭菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。②蒸气灭菌：用于玻璃器皿、滤器橡胶塞、解剖用具、耐热塑料器具、受热不变性的溶液等，不同物品其有效灭菌压力和时间不同，如培养用液、橡胶制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高压灭菌10min;布类、玻璃制品、金属器械等用103kPa(121....