原代细胞培养实验器具清洗步骤

原代细胞实验器具清洗l玻璃类1、主要有：培养瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，离心管，试管，培养皿等。2、清洗步骤：泡在含有洗洁净的自来水中→捞出来用毛刷将实验器具各个面刷洗至少25遍→自来水冲洗25遍→过一遍一蒸水→泡入铬酸,过夜(24h左右)→从铬酸中捞出器具，自来水冲洗25遍→过三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱内烘干→收入柜子备用→用前高温灭菌(121℃，25min)→烘干→使用。注意：新的玻璃器具先要泡盐酸1天，然后清洗步骤与上面相同。l塑料类1塑料类器具主要包括：孔板，大枪头...

影响哺乳动物细胞复苏的因素

影响哺乳动物原代细胞复苏的因素包括：（a）细胞类型，（b）生长阶段，（c）细胞处于细胞周期的哪个阶段，（d）终悬液中的细胞数量和浓度。可通过优化以上因素来提高复苏细胞活力，另外，还需考虑冻存保护剂的特性以及冻存过程的具体操作。哺乳动物细胞培养对其他细胞和微生物的污染特别敏感，例如Hela细胞。由于这种特性，初始细胞系可通过同工酶分析、染色体组型分析、免疫分析或基因组分析，检测来源。冻存前后均应该进行如上检测。特别需要注意的是，病毒和支原体污染。一套完整健全的哺乳动物细胞系鉴定...

神经细胞分散培养

（一）细胞系选材常用胚胎动物或新生鼠神经组织。鸡胚常用胚龄6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不过也有认为与组织相关。如大白鼠胚胎以19d为宜，小鼠以18d为宜，大鼠纹状体以10d为宜；若纹状体与黑质联合培养的大鼠胚，则黑质以13d，纹状体18-21d为宜；小脑以20-21d小鼠胚胎，所获蒲氏细胞成活率高，颗粒细胞正在分化；脊髓与DRG联合培养，常用4-7d鸡胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神经成活率高。（二）取材。脑则取出相应组织，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消...

巨核细胞基本生理功能分析

巨核细胞株虽然在骨髓的造血细胞中为数zui少，仅占骨髓有核细胞总数的0.05%，但其产生的血小板却对机体的止血功能极为重要。每个巨核细胞均可产生1000-6000个血小板。生成血小板的巨核细胞也是从骨髓中的造血干细胞分化发展来的。造血干细胞首先分化生成巨核系祖细胞，也称巨核系集落形成单位(colonyformingunit-megakaryocyte,CFU-Meg)。祖细胞阶段的细胞核内的染色体一般是2-3倍体。当祖细胞是2倍体或4倍体时，细胞具有增殖能力，因此这是巨核细胞...

原代细胞核的分离提取

(一)原代细胞操作步骤1．用颈椎脱位的方法处死小白鼠后，迅速剖开腹部取出肝脏，剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9％NaCl的烧杯中，反复洗涤，尽量除去血污，用滤纸吸去表面的液体。2．将湿重约1g的肝组织放在小平皿中，用量筒量取8ml预冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液，先加少量该溶液于平皿中，尽量剪碎肝组织后，再全部加入。3．剪碎的肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中，左手持之，右手将匀浆捣杆垂直插入管中，上下转动研磨3～5次，...

程序降温盒提高细胞冻存的存活率的方法

1.细胞系实验室冻存盒平时放4度，需要冻细胞时直接拿出来用就可以了。第二天转移至液氮，贵重的细胞尽快转移，不然会影响复苏成活率的。一般是用5次就更换一下异丙醇。现在也有一些商品化冻存液可以直接丢进-80的，很方便，效果也不错的。2.异丙醇的量是要保证的，不能低于表明的线，否则不能起到很好的程序性降温作用，我们是在4度放置，放了细胞后立马放到-80度冰箱，第二天再转移到液氮，效果很不错。异丙醇熔点：-87.9度的色透明具有乙醇气味的可燃性有毒液体。注意了有可燃性!急性毒性：口服...

原代细胞培养玻璃器皿的清洗

①原代细胞浸泡：新购进的玻璃器皿常带有灰尘，呈弱碱性，或带有铅、碑等有害物质，故先用自来水浸泡、水洗，然后再用2%~5%盐酸浸泡或煮沸30min，水洗。要领：培养用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能顺利进行。用后的玻璃器皿常带有大量的蛋白质附着，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。②刷洗：用软毛刷、洗涤剂，刷去器皿上的杂质，冲洗晾干。要领：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂去器皿上的杂质、刷洗次太多，会损害器皿的表面光洁度，洗涤剂有使pH上升的趋势，所以易选用软毛...

原代细胞线粒体膜势能的检测

原代细胞线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中zui早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine123、3，3-Dihexyloxacarbocyanineiodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbe...