哺乳动物转录调控原理分析

细胞系RNA聚合酶II是三大RNA聚合酶之一，存在于基因转录装置的核心位置，编码蛋白质基因的转录受到RNA聚合酶的调控。RNA聚合酶解开DNA双链，沿着一条链移动。在移动过程中，它们一边“解读”DNA链上的核苷，一边合成一条相应的RNA链。由PolII合成的RNA就是mRNA，它们将合成蛋白质的指令传给核糖体。过往的研究证实，在许多哺乳动物的多个基因进行转录时，RNAPII往往会在启动子附近的某些特定区域发生停顿。这种停顿往往是发生在RNAPII复合体形成和转录起始之后。而这...

过氧化物酶标记测定法原理

肿瘤细胞原理：脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端,与dATP形成异多聚体,并可与连接了报告酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶)的抗地高辛抗体结合.在适合底物存在下,过氧化物酶可产生很强的颜色反应,特异准确的定位出正在凋亡的细胞,因而可在普通光学显微镜下进行观察.毛地黄植物是地高辛的*来源.在所有动物组织中几乎不存在能与抗地高辛杭体结合的配体,因而非特异性反应很低.抗地高辛的特异性...

新生小鼠颈上交感神经元分散细胞培养

原代细胞交感神经系统在维持机体的正常功能和对环境的适应性反应中起着十分重要的作用。交感神经细胞培养特别有助于神经细胞发育和可塑性研究，利用体外培养系统可进行交感神经细胞的发生、死亡、形态和生化发育、递质表形的获得，以及靶组织与传入纤维的突触形成的研究。此外，通过体外培养系统可获得关于神经营养因子、激素，细胞因子等调节交感神经元发育的信息，了解传入纤维的输入以及与靶组织的的机制。1、材料和方法实验用出生当天的昆明种小鼠，在无菌条件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖镊在解剖显...

常见的细胞因子受体检测的方法介绍

（一）活细胞系吸收试验原理将过量的待测细胞与*细胞因子共孵育，若细胞膜表面存在相应的细胞因子受体即可结合细胞因子，通过测定前、后细胞因子生物活性的对比情况可推测待测细胞表面细胞因子受体是否存在。方法1．过量的待测细胞、适量细胞因子准备。2．共孵育，时间根据待测细胞和细胞因子选择。可设2h,4h,6h,8h和更长时间。3．离心（1500r/min,5分钟）收集上清液。4．测定孵育前后的细胞因子活性。方法同细胞因子测定。注意事项此法简便，适用于定性，但不适用于定量检测。（二）核素...

原代细胞计数的操作步骤

（一）原代细胞计数1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。3、静置3分钟。4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：细胞数/ml＝4大格细胞总数/4×10000注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。（二）原代细胞活力1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中。2、加入0.5ml0.4...

从原培养容器中分离细胞操作流程

细胞系从基层迅速分离细胞，且保持细胞完整性的一般步骤。这一步骤并不意味着对于所有细胞系的广泛应用，每一种系统*条件和施用浓度应该根据经验加以确定。再次培养时检测细胞的活性。细胞的活率应该超过90%对于无血清培养基，降低胰蛋白酶使用量。1.移弃使用过的细胞培养基。2.使用不包含有钙镁的平衡盐溶液或EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸.)清洗细胞系(看表确定正确的清洗溶液)。在培养瓶对着细胞的一面加入清洗溶液，通过转动培养瓶1到2分...

成纤维细胞排除法操作流程

1.原代细胞机械刮除法：是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头(用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝)、或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用(也可用特制电热烧灼器刮除)。刮除程序为：(1)标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位;(2)刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间;(3)用Hanks液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞;(4)注入培养液继续培养，如发现仍有成纤维细胞残留，可重复刮除至*除掉为止2.反复贴壁法：根据肿瘤细胞比...

对淋巴细胞系进行体外刺激预孵育、或板内同步刺激培养

1、将抗原和淋巴细胞系在体外混合，刺激并预孵育，是通用的方法。预孵育的淋巴细胞，在置入ELISPOT板之前应使用复温到37℃的培养液清洗细胞1-2次。置入ELISPOT板以后通常在37℃培养5～6小时。2、对于高度特异性抗原，可以采用将淋巴细胞和抗原同时加入ELISPOT板孔中，37℃培养箱中，同步进行刺激、培养、和细胞因子捕获。淋巴细胞板内同步刺激培养的时间通常为22～24小时。3、ELISPOT试验检测的是每一个分泌细胞系因子的活化细胞。在培养细胞过程中，任何移动、震动（...