常见的细胞因子受体检测的方法介绍

（一）活细胞系吸收试验原理将过量的待测细胞与*细胞因子共孵育，若细胞膜表面存在相应的细胞因子受体即可结合细胞因子，通过测定前、后细胞因子生物活性的对比情况可推测待测细胞表面细胞因子受体是否存在。方法1．过量的待测细胞、适量细胞因子准备。2．共孵育，时间根据待测细胞和细胞因子选择。可设2h,4h,6h,8h和更长时间。3．离心（1500r/min,5分钟）收集上清液。4．测定孵育前后的细胞因子活性。方法同细胞因子测定。注意事项此法简便，适用于定性，但不适用于定量检测。（二）核素...

原代细胞计数的操作步骤

（一）原代细胞计数1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。3、静置3分钟。4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：细胞数/ml＝4大格细胞总数/4×10000注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。（二）原代细胞活力1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中。2、加入0.5ml0.4...

从原培养容器中分离细胞操作流程

细胞系从基层迅速分离细胞，且保持细胞完整性的一般步骤。这一步骤并不意味着对于所有细胞系的广泛应用，每一种系统*条件和施用浓度应该根据经验加以确定。再次培养时检测细胞的活性。细胞的活率应该超过90%对于无血清培养基，降低胰蛋白酶使用量。1.移弃使用过的细胞培养基。2.使用不包含有钙镁的平衡盐溶液或EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸.)清洗细胞系(看表确定正确的清洗溶液)。在培养瓶对着细胞的一面加入清洗溶液，通过转动培养瓶1到2分...

成纤维细胞排除法操作流程

1.原代细胞机械刮除法：是用不锈钢丝末端插有橡胶刮头(用胶塞剪成三角形插以不锈钢丝)、或裹少许脱脂棉制成，装入试管中高压灭菌后备用(也可用特制电热烧灼器刮除)。刮除程序为：(1)标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位;(2)刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间;(3)用Hanks液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞;(4)注入培养液继续培养，如发现仍有成纤维细胞残留，可重复刮除至*除掉为止2.反复贴壁法：根据肿瘤细胞比...

对淋巴细胞系进行体外刺激预孵育、或板内同步刺激培养

1、将抗原和淋巴细胞系在体外混合，刺激并预孵育，是通用的方法。预孵育的淋巴细胞，在置入ELISPOT板之前应使用复温到37℃的培养液清洗细胞1-2次。置入ELISPOT板以后通常在37℃培养5～6小时。2、对于高度特异性抗原，可以采用将淋巴细胞和抗原同时加入ELISPOT板孔中，37℃培养箱中，同步进行刺激、培养、和细胞因子捕获。淋巴细胞板内同步刺激培养的时间通常为22～24小时。3、ELISPOT试验检测的是每一个分泌细胞系因子的活化细胞。在培养细胞过程中，任何移动、震动（...

细胞电穿孔转染操作步骤

原代细胞对于细胞转染而言，目前主要是转染试剂(多为脂质体)的天下。磷酸钙转染的方法虽说有些out，但有些细胞还就认准这一套。不过，对于某些淋巴细胞而言，化学方法怎么都不奏效，那我们只能采取强硬手段，用电穿孔的方法进行转染。应用电穿孔时，一般都选择恒定的电容，然后在不同的场强下轰击细胞，以摸索*实验条件。就大多数细胞而言，在电穿孔后能有20-50%的细胞存活率就OK，足以保证DNA的成功转染。电穿孔通常在室温下进行，之后将细胞置于冰上，以延长原代细胞膜孔道开放的时间。与传统的磷...

植物细胞质壁分离技术分析

(1)原代细胞质壁分离法：成长的植物细胞一般具有中央液泡，在中央液泡和细胞壁之间为细胞质的薄层及其内外膜——液泡膜和质膜。液泡中的胞液具有一定的溶质势(或称渗透势)，而活的原生质特别是液泡膜和质膜则具有半透性。所以，当细胞与外界溶液接触时，便与外液构成渗透系统，并可能发生水分的移动。若外液的水势低于胞液的溶质势，则水分外渗的结果可使原生质随着液泡一起收缩而脱离细胞壁，发生质壁分离，质壁分离的细胞与水或水势较高的溶液接触时，可重新吸水而是质壁分离复原。原代细胞实验步骤1、试剂的...

动物细胞培养技术研究开发和工业化

动物细胞培养技术研究开发和工业化动物细胞株（杂交瘤细胞、CHO细胞、昆虫细胞等）大规模培养技术及其生物反应器工程可广泛应用于抗体、基因重组蛋白质药物、病毒疫苗等生物技术产品的研究开发和工业化，长期以来得到国家重大科技攻关计划、863计划等的大力支持，拥有一支精干的研究开发团队和一系列现代化设备仪器，建立了由无血清悬浮培养技术、培养过程及生物反应器设计放大与强化技术、大规模高密度流加和连续灌注培养技术、培养过程计算机实时监测与控制技术、病毒类产品大规模技术等核心技术组成的大规模...