细胞株计数的难题与解决方案

细胞株和病毒的放大培养面临挑战。当需要量增加千倍时，细胞培养瓶对于工业规模是不可行的。微载体为生物反应器中贴壁细胞的生长提供了方便，微载体充当贴壁细胞可附着的支架，允许它们增殖，而生物反应器使细胞-微载体复合体自由悬浮在培养基中。因此，贴壁细胞也可以像悬浮细胞那样生长，从而简化了放大培养，并允许利用现有的资源用于过程优化和。传统方法的微载体的细胞计数耗时耗力，且计数结果不准确，需要离心样品、PBS重悬、胰蛋白酶消化细胞和台盼蓝或者结晶紫染色等多个步骤来计数在微载体上生长的细胞...

原代细胞实验室检测方法

原代细胞实验室检测（一）包涵体的检测。1.血片及白细胞涂片制备采集的抗凝血标本尽快用血球层推血片，待干燥后冷丙酮固定10min；或提取抗凝血中的白细胞并进行涂片，待干燥后冷丙酮固定10min。2.染色通常采用瑞氏（Wright）染色法、姬氏（Giemsa）染色法及瑞－姬混合染色法。有条件的实验室，可使用美国CDC推荐的染色方法。3.染液配置方法（1）瑞－姬染液：取瑞氏染料和姬氏染料各0.5g，以甲醇研溶，加甲醇500ml保存，每天摇匀１次，１周后可使用。（2）改良McDona...

原代细胞增殖生长数值的步骤

测定原代细胞增长数值常用zui简便的方法。一般过程为1.接种21孔/24孔板细胞（如用培养瓶时则21瓶）。2.分7组，每组3孔（或瓶），培养一周（7天），期间逐日检测一组，计数。3.把7天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶仪器、耗材吸管实验步骤1.悬液制备取待测生长状态良好细胞，增长至接近汇合时，向培养瓶内加1ml升0.25%胰蛋白酶液，37℃温箱中消化，至细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液、加新的培养液、轻吹打制备成细悬液、计数；2.接种向每孔...

保持原代细胞其多能性的蛋白质的方法

蛋白质Tet能帮助原代细胞保持多能性。Zhang研究组分析了Tet1在整个小鼠胚胎干细胞基因组中的存留时间。他们发现Tet1采用双管齐下的办法维持小鼠胚胎干细胞的状态。一方面，Tet1可对分化起重要作用的基因保持"沉默"；另一方面Tet1也可激活多能性基因。研究组着重于研究Tet1催化反应产物-5羟甲基胞/嘧啶。5羟甲基胞嘧啶是胞嘧啶的修改版-C在四个主要的DNA碱基：A、T、G、C。5羟甲基胞嘧啶和5甲基胞嘧啶分别被称为是DNA第五、第六个碱基，但是5羟甲基胞嘧啶是zui近...

如何判断原代细胞污染了？

状态1：原代细胞培养液变浑浊了，经常见到是米汤样，黄色液体，一般认为细菌污染。状态2：细胞培养基内含有能动的小黑点，一般认为是黑胶虫。状态3：胞培养基清亮，但是能看到飘在培养液带有毛毛的白色的菌状物质，有可能就是真菌感染。策略：细胞污染了就直接扔了，还得把培养箱用酒精棉球擦干净，并用紫外照射半小时，防止再次污染。同时建议细胞培养时，在培养基中加入青链霉素(尤其是初学者)细胞培养过程中，细胞周围包括细胞上有很多小黑点，怎么办?策略1：用胰酶消化下来后，低速短时间离心，不同实验室...

肿瘤细胞活力评估难度低

传统的肿瘤细胞培养主要是通过显微镜下形态学变化以及传代培养周期的变化预估细胞生长生存状态。这种主观判断既无法量化，也无法进行统计学分析。因此，目前对细胞存活质量的判断并没有准确、客观的统一标准，并且对体外培养细胞的存活质量控制往往被科研工作者们“忽略”，从而导致实验结果的不稳定。体外细胞的有效培养新概念——“细胞质控”。通过细胞活力、细胞凋亡、细胞周期、细胞增殖及DNA损伤五方面对细胞生长生存状态进行的监控。在这五个方面中，影响zui大的便是细胞活力，下面咱们专门来谈一谈细胞...

原代细胞中的核糖核酸可分为哪些种类？

根据原代细胞结构和功能的不同，细胞中的RNA可分为三类：即信使（mRNA）、转运RNA（tRNA）和核糖体RNA（rRNA）。mRNA以DNA为模板，在RNA聚合酶的催化下，按碱基互补原则，从分子的5，末端向3，末端方向在细胞核内合成，因此，mRNA分子能准确地传递DNA链上的遗传信息。合成后的mRNA经核孔进入细胞质，并与核糖体结合，将单核糖体连成多核糖体。由于细胞内的基因和基因组很多，而mRNA是根据要表达的基因或基因组合成的，因此mRNA种类复杂多样。tRNA是RNA中...

原代细胞培养新技巧

研究人员发现了一个能提高人类原代细胞，以及诱导多能干细胞iPS三倍数量的新方法，而且这种方法还无需一般培养方法中都需要的小鼠饲养细胞。胚胎干细胞和iPS细胞由于其杰出的再生能力，吸引了众多科学家，这些多能干细胞是许多疾病的新希望，比如帕金森症，阿兹海默症等，也是筛选信号的新方向，同时这些细胞还能为糖尿病，神经或其它组织损伤提供移植治疗细胞。但是这些技术应用需要百万，甚至千万的细胞，目前的培养方法无法达到这一需求。而的这篇文章在之前研究的基础上——帮助研究人员了解了*的表面化合...