原代细胞增殖生长数值的步骤

测定原代细胞增长数值常用zui简便的方法。一般过程为1.接种21孔/24孔板细胞（如用培养瓶时则21瓶）。2.分7组，每组3孔（或瓶），培养一周（7天），期间逐日检测一组，计数。3.把7天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶仪器、耗材吸管实验步骤1.悬液制备取待测生长状态良好细胞，增长至接近汇合时，向培养瓶内加1ml升0.25%胰蛋白酶液，37℃温箱中消化，至细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液、加新的培养液、轻吹打制备成细悬液、计数；2.接种向每孔...

保持原代细胞其多能性的蛋白质的方法

蛋白质Tet能帮助原代细胞保持多能性。Zhang研究组分析了Tet1在整个小鼠胚胎干细胞基因组中的存留时间。他们发现Tet1采用双管齐下的办法维持小鼠胚胎干细胞的状态。一方面，Tet1可对分化起重要作用的基因保持"沉默"；另一方面Tet1也可激活多能性基因。研究组着重于研究Tet1催化反应产物-5羟甲基胞/嘧啶。5羟甲基胞嘧啶是胞嘧啶的修改版-C在四个主要的DNA碱基：A、T、G、C。5羟甲基胞嘧啶和5甲基胞嘧啶分别被称为是DNA第五、第六个碱基，但是5羟甲基胞嘧啶是zui近...

如何判断原代细胞污染了？

状态1：原代细胞培养液变浑浊了，经常见到是米汤样，黄色液体，一般认为细菌污染。状态2：细胞培养基内含有能动的小黑点，一般认为是黑胶虫。状态3：胞培养基清亮，但是能看到飘在培养液带有毛毛的白色的菌状物质，有可能就是真菌感染。策略：细胞污染了就直接扔了，还得把培养箱用酒精棉球擦干净，并用紫外照射半小时，防止再次污染。同时建议细胞培养时，在培养基中加入青链霉素(尤其是初学者)细胞培养过程中，细胞周围包括细胞上有很多小黑点，怎么办?策略1：用胰酶消化下来后，低速短时间离心，不同实验室...

肿瘤细胞活力评估难度低

传统的肿瘤细胞培养主要是通过显微镜下形态学变化以及传代培养周期的变化预估细胞生长生存状态。这种主观判断既无法量化，也无法进行统计学分析。因此，目前对细胞存活质量的判断并没有准确、客观的统一标准，并且对体外培养细胞的存活质量控制往往被科研工作者们“忽略”，从而导致实验结果的不稳定。体外细胞的有效培养新概念——“细胞质控”。通过细胞活力、细胞凋亡、细胞周期、细胞增殖及DNA损伤五方面对细胞生长生存状态进行的监控。在这五个方面中，影响zui大的便是细胞活力，下面咱们专门来谈一谈细胞...

原代细胞中的核糖核酸可分为哪些种类？

根据原代细胞结构和功能的不同，细胞中的RNA可分为三类：即信使（mRNA）、转运RNA（tRNA）和核糖体RNA（rRNA）。mRNA以DNA为模板，在RNA聚合酶的催化下，按碱基互补原则，从分子的5，末端向3，末端方向在细胞核内合成，因此，mRNA分子能准确地传递DNA链上的遗传信息。合成后的mRNA经核孔进入细胞质，并与核糖体结合，将单核糖体连成多核糖体。由于细胞内的基因和基因组很多，而mRNA是根据要表达的基因或基因组合成的，因此mRNA种类复杂多样。tRNA是RNA中...

原代细胞培养新技巧

研究人员发现了一个能提高人类原代细胞，以及诱导多能干细胞iPS三倍数量的新方法，而且这种方法还无需一般培养方法中都需要的小鼠饲养细胞。胚胎干细胞和iPS细胞由于其杰出的再生能力，吸引了众多科学家，这些多能干细胞是许多疾病的新希望，比如帕金森症，阿兹海默症等，也是筛选信号的新方向，同时这些细胞还能为糖尿病，神经或其它组织损伤提供移植治疗细胞。但是这些技术应用需要百万，甚至千万的细胞，目前的培养方法无法达到这一需求。而的这篇文章在之前研究的基础上——帮助研究人员了解了*的表面化合...

如何对原代细胞进行保存和培养？

原代细胞形成的单层细胞汇合以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生成空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭，都将影响细胞的生长，这一程序常称为传代或传代培养。原代培养在传代时即为细胞系，能连续培养下去的为连续细胞系；不能连续培养的为有限细胞系。通常，传代培养是指扩大培养，也就是将一份细胞一分为二或者一分为三进行培养等。但严格说来，不论稀释与否，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代或传代培养。可以理解，在任何时候，细胞从一个瓶子接种到另一个瓶子时总会丢失一部分，因...

肿瘤细胞增殖检测：3H同位素渗入法实例

一、原理肿瘤细胞在有丝分裂原PHA、ConA等的刺激下，产生增殖反应，DNA和RNA合成明显增加，如在培养液中加入3H－胸腺嘧啶核苷（3H-TdR），则可被转化中的细胞摄入。测定标记淋巴细胞的放射强度可反映淋巴细胞增殖的程度。二、仪器和材料RPMI-1640细胞培养液、小牛血清、2-巯基乙醇（2-ME）、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A（ConA）、Hank's液、PBS缓冲液（pH7.2-7.4）、3H-TdR、闪烁液[2，5-二苯基恶唑（PPO）0.5g、1，4-双-（5-苯基...