如何使细胞培养物快速适应无血清培养基？

许多原代细胞系容易适应无血清培养基和无蛋白培养基，而对环境要求过高的其它细胞却难以适应变化，这就需要更为专业的方法来适应变化。而根据细胞系的特性，有两种方法可使细胞适应无血清培养基。*种方法是连续适应/循序隔绝法；另一种方法是直接适应。一、连续适应/循序隔绝法*种方法是连续适应/循序隔绝法。通过一系列的血清还原步骤，使细胞适应无血清培养基。这是优先选用的方法，且不对细胞培养环境形成太过恶劣的变化。连续适应/循序隔绝法——方法1使原培养基内的细胞连续地经过以下几个阶段：阶段1：...

兔食管上皮细胞培养步骤

原代细胞实验材料：1.大兔的正常食管组织2.6孔培养板：用多聚赖氨酸4℃包被过夜3.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.44.手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊实验方法：1.处死大兔，取正常食管组织放入含双抗的PBS（pH=7.2）中反复清洗3次，以洗去组织表面的血丝及粘液；2.小心的用眼科剪镊将食管黏膜与黏膜下组织分离；3.分离出的粘膜组织用含双抗的PBS（pH=7.2）反复冲洗若...

肿瘤细胞培养方法

肿瘤细胞培养成功关键在于：取材、成纤维细胞的排除、选用适宜的培养液和培养底物等几个方面。在具体培养方法方面，肿瘤细胞培养与正常组织细胞培养并无原则差别，初代培养应用组织块和消化培养法均可。1、取材：人肿瘤细胞来自外科手术或活检瘤组织。取材部位非常重要，体积较大的肿瘤组织中有退变或坏死区，取材时尽量避免用退变组织，要挑选活力较好的部位。癌性转移淋巴结或胸腹水是好的培养材料。取材后宜尽快进行培养，如因故不能立即培养，可贮存于4℃中，但不宜栽过24小时。2、培养基：肿瘤细胞对培养基...

应用细胞融合技术制备染色体

原代细胞实验目的通过细胞融合技术，初步了解染色体提前凝集标本制备原理、方法及间期细胞三种时相的提前凝集染色体特点。【实验用品】一、材料人宫颈癌上皮细胞(HeLa细胞)二、器材和仪器显微镜、离心机、水浴箱、热吹风机、10ml刻度离心管、5(1/2)针头注射器、试管架、染色槽、废液缸、吸水纸、擦镜纸、冰冻载玻片、香柏油瓶、记号笔、酒精灯。三、试剂50％PEG、Hanks液(pH7.4)、RPMI一1640培养基(含10％灭活小牛血清，pH7.4)10μg／ml秋水仙素，0.075...

细胞培养过程中添加剂起到的作用

肿瘤细胞能量来源：谷氨酰胺L－谷氨酰胺是一种氨基酸，细胞的重要能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。同时L-谷氨酰胺不稳定，在中性的水溶液中会自发降解；降解产物对细胞有毒性（对干细胞，原代细胞影响尤其大）。能影响细胞活性、蛋白表达水平及糖基化模式等。那如何解决呢？方案有二：选择不含谷氨酰胺的培养基，自己添加选择稳定的谷氨酰胺替代物经过科学家不断努力，终于找到了稳定的谷氨酰胺替代物：glutaGRO。它有何方功能呢？原来，它是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺缩合形成的二肽，稳定性...

细胞培养技术注意事项

1.原代细胞实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。2.无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、...

原代细胞复苏技术

1.原代细胞冻存复苏技术简介在ELISPOT检测的应用中，往往需要用到冻存的淋巴细胞样品作为检测细胞。由于ELISPOT检测的是细胞的免疫功能，不仅仅需要保持细胞的存活率，而且还要保证细胞的功能不发生变化。传统的细胞冻存方法通常是为了保存细胞株，对细胞存活率的要求不高，更没考虑保持细胞原有的免疫状态，所以传统的细胞冻存方法已经不能满足ELISPOT检测的要求。参见图7.1。考虑到ELISPOT检测的特殊性，荷兰U-CyTech公司经过精心的研究与反复的验证，推出了Cryost...

细胞常见的保存方法

原代细胞保存温度越低，保存时限更长；温度越低，对细胞伤害越大；低温也不怕，我有防冻剂（e.g.甘油）。下面的表格就是五种常见保存细菌细胞的方法和大约时限。保存条件温度°C大约时间琼脂平板44-6周（AgarPlate）穿刺培养基43周-1年（stabculture）冰冻-201-3年超低温冰冻-201-10年冻干≤415年+但是，具体到你用的那一种菌用什么方法保存能够保存多长时间，就要视情况而定了，并没有一个*答案，上表中所列出来的时限一般来说是适用大部分细菌样本的。小编如果...