判断原代细胞活性是否正确工作的原理

原代细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标,如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。目前常用的方法有很多,如有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、H放射性同位素掺入法、MTT法等。本文总结了一些常用的细胞活性检测方法的原理、特点，并对比了各自的优缺点。一、染色计数法1.化学染色法染色计数法是细胞培养中检查细胞死活zui常用的方法，直接利用死细胞和活细胞对染料的不同亲和力，检查细胞活性，能在光学显微镜下观察到染色结果。可分为两类：死细胞着色法和活细...

详解原代细胞冻存的步骤

（1）选择处于对数生长期的原代细胞，在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。（2）去上清液，加入含20%小牛血清的*培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为5×106～1×107/mL之间。（冻存培...

胰酶不能去除对原代细胞影响的原因

原代细胞消化时，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是没有问题的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，去除。EDTA是一种化学螯合剂，主要作用在于能螯合Ca、Mg离子，使细胞分离。但EDTA不能被血清中和，消化后要*清洗去除，否则细胞易脱壁。胰酶胰酶和EDTA联合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。随着时间延长，胰酶的消化能力减弱。胰酶可分装冻存，在使用前从-20℃冰箱取出。尽量避免在4℃长期保存。商品化胰酶溶液需要用干冰运输，在运输过...

肿瘤细胞在药物心脏毒性筛选中的应用

肿瘤细胞和诱导型人多能干细胞诱导分化的心肌细胞相似,具有相同的形态结构,且随着培养时间的推移,功能性K+、Na+、Ca2+通道密度逐渐增加、心肌特异性基因ANF、α-MHC、MLC-2a的表达量增加,具有相似的动作电位时程和收缩性等特点,相当于幼稚型心肌细胞。将它们应用于已知作用药物的心脏毒性筛选,检测心肌细胞离子通道、动作电位、心脏损伤标志物、收缩功能的变化,获得与临床相似的结果。因此,建立人胚胎干细胞和诱导型人多能干细胞诱导分化心肌细胞的体外评价模型,大大减少了药物的时间...

5-羟色胺可调控造血肿瘤细胞移植

肿瘤细胞是一群能自我更新并分化为各种成熟血细胞的多能干细胞。基于其重建血液系统的能力，造血干细胞移植已成功用于治疗白血病等恶性血液疾病。如何体外诱导和扩增足够数量且有功能的HSPCs，是临床上恶性血液疾病治疗的瓶颈，也是基础科学研究的难点和热点之一。其目前尚未成功的根本原因在于人们对HSPCs产生和扩增的调控机制认识仍不全面。因此，应用模式动物深入和系统地研究体内HSPCs产生和扩增过程及其调控机制，将对体外诱导并扩增有功能的HSPCs具有十分重要的指导意义。中国科学院动物研...

原代细胞直接修复细胞促使损伤创面愈合

原代细胞临床上烧伤常常并发感染、休克、脓毒血症、MODS(多器官功能障碍综合征)等严重并发症，具有很高的病死率。但是，目前临床上常用的清创换药、抗感染、补液、生长因子促进愈合、自身或者异体移植等治疗方法却不能取得*理想可靠的效果，而脐带间充质干细胞展现出的强大修复能力,为烧伤治疗开辟了崭新的路径。脐带间充质干细胞是从人脐带华通胶中分离出来的一种基质细胞，其具有增殖率高、易于分离、便于检测、不违背伦理道德和无免疫原性或低免疫原性，植入体内有良好的组织相容性，无明显排斥反应，生物...

细胞株分化过渡状态

研究人员利用细胞株分析技术发现Lgr5+小肠干细胞来源的祖细胞实际上包含了两个不同的细胞群体，进一步揭示了小肠干细胞分化过程的zui早期步骤。位于每个小肠肠窝底部的LGR5+小肠干细胞是维持干细胞和小肠上皮细胞自我更新的动力，之前有研究发现干细胞在分化形成具有成熟功能的终末细胞之前会经历短暂扩充祖细胞（transit-amplifyingprogenitors）阶段，这些小肠双潜能祖细胞会单向分化形成具有吸收功能的细胞或具有分泌功能的细胞。之前还有研究发现在血液中造血祖细胞会...

原代细胞培养中血清为什么不是越多越好

血清是原代细胞培养中用量zui大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。5.起酸碱度缓冲液作用。6.提供蛋白酶抑制剂，使在原代细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，...