细胞系转染样品的处理步骤

1.细胞系将处理好的盖玻片放在12孔板底部如果细胞贴壁不牢（如HEK293）或者是半贴壁细胞（如PC12），可以用细胞刮子将鼠尾胶原均匀地涂抹在玻片上包被。也可使用多聚赖氨酸，但是效果不如鼠尾胶原。事实上大部分贴壁的细胞都不用进行包被。如果在操作中发现细胞脱片严重，则可考虑进行包被来提高细胞贴壁能力。2.将与培养基混匀后的细胞悬液加入孔中这一步混匀非常重要，如果不匀，一般细胞都会聚集在玻片中央区域，会对形态观察产生不利影响。分细胞的时候要注意进行形态观察的时候应该将细胞分得相...

详解肿瘤细胞因子的分类特征

肿瘤细胞之间的信息传递可以通过细胞表面的受体与配体的相互作用，也可以通过细胞产生的可溶性分子。参与白细胞间相互作用的可溶性分子称为白细胞介素（interleukin，IL），简称白介素，通常将其中单核细胞产生的分子称为单核因子（monokine），将淋巴细胞产生的分子称为淋巴因子（Lymphokine）。后来发现，这些分子不仅白细胞可产生，其他细胞如内皮细胞、成纤维细胞和角朊细胞也能产生，便将这些分子统称为细胞因子（cytokine，Ck）。因而细胞因子是由细胞产生的小分子可...

如何降低肿瘤细胞分离中的污染

在分离单核肿瘤细胞时，我们就必须采取措施来降低血小板污染。在制备单核细胞悬液时，Stemcell给出了如下的建议：1.从Ficoll密度梯度离心中取出单核细胞层时，避免吸到富含血小板的血浆。2.缓慢离心，洗涤单核细胞(120×g，10分钟，常温)。3.小心弃上清，其中含有血小板，用新鲜的缓冲液重悬细胞(记得换个干净的吸头)。4.重复上面2步，总共洗涤3次。另外，Stemcell还给出了一些降低血小板污染的其他建议：•使用大口径的针来抽取血液样本•轻轻地抽血，如果使用注射器推杆...

肿瘤细胞的分离和纯化

肿瘤细胞的分离和纯化:1.取2～3公斤重的家兔，耳缘静脉注射10ml空气处死动物或注射2ml(含130mg)戊巴比妥麻醉动物。仰卧固定，剪开胸壁。以下过程注意无菌操作。小心从环状软骨下方剪下气管，分离心脏和血管，取出肺，剪去脂肪和结缔组织。用无菌纱布小心擦净肺表面，称重。2.分离肺泡巨噬细胞：用夹子夹住气管，使肺悬空。向气管中注射40ml无菌的冷生理盐水，让生理盐水进入全部肺泡。用镊子提起气管，从夹子下面剪断气管，将肺中的液体倒入离心管中。再用同样方法，用40ml无菌冷生理盐...

如何选择原代细胞常用的荧光素 ？

.原代细胞认为荧光信号之间的干扰，会增加信号检测背景①荧光信号强细胞群体的SD比荧光信号弱的细胞群体大；②多色分析时，一种荧光素（如FITC）的光会漏入相邻的荧光素（如PE）的检测器。漏入的光越多，需要补偿的越多，对分辨率的影响就越大。尤其是弱表达的信号。6.尽量减少荧光信号之间的干扰①检测的颜色越多，面临的荧光信号之间的干扰越多；②选择试剂组合时尽可能降低荧光发射波长之间的重叠。.仪器配置的差异，多色分析不可能全选“zui亮”的荧光素，但对于特定的一款仪器，可以根据荧光的强...

详解肿瘤细胞侵袭实验步骤

肿瘤细胞侵袭能力检测在肿瘤学（迁移、侵袭）和免疫学（迁移、趋化）中是常规实验。1.侵袭是细胞迁移的一种。细胞迁移分三种类型：趋触、趋化和侵袭。2.肿瘤细胞的侵袭性是肿瘤相关信号通路、药物治疗、靶向治疗、致癌/抑癌基因等肿瘤学研究的一个重要指标。3.免疫细胞具有趋化性，例如粒细胞、巨噬细胞、单核细胞对CCL、CXCL类因子的趋化性，免疫细胞异常（如过度趋化）通常会引起一些炎症类疾病如风湿、关节炎、牛皮藓、动脉粥样化等。具体操作以配合24孔板的8μMPET膜Millicell悬挂...

肿瘤细胞转染实验小贴士

肿瘤细胞转染目前已经成为研究和控制真核细胞基因表达的重要手段。本文整理了一些关于转染实验前的准备工作及一些实验过程中的小贴士，希望这些信息能够帮助各位科研君们做好转染实验及提高实验效率。①从健康细胞开始Ⅰ转染实验前，细胞解冻后传代3–4次。这使得细胞从解冻过程中恢复过来，并恢复正常的生长速度。Ⅱ仅使用活性90%的细胞——使用台盼蓝染色可轻松测定细胞活性。Ⅲ定期传代细胞，切勿让细胞长到汇合状态或过度生长。如果让细胞长到汇合状态，可能会改变细胞的生长速度以及形态。a.请在汇合率达...

原代细胞有丝分裂的实验方法

(一)原代细胞试验原理细胞有丝分裂指数(mitoticindex，MI)是指属于分裂期的细胞占总细胞数的百分率．用于表示细胞增殖旺盛的程度，也可用于检测药物对细胞增殖能力的影响。用盖玻片培养法培养细胞，做固定和染色后，镜下观察和计数1000个细胞中处于分裂期的细胞数并计算MI。(二)材料1．待检材料(药物)。2．细胞培养成层的贴壁细胞。3．试剂甲醇、3％吉姆萨染液。4．器材CO2培养箱、倒置显微镜、盖玻片(2．2cm×2．2cm，需预先清洗和灭菌处理)、塑料培养皿(3．5cm...